宋春丽，张 琰，周义文

南方医科大学深圳医院临床检验医学中心,广东深圳 518100

肝癌是我国常见的恶性肿瘤，其起病隐匿、进展迅速、恶性程度高、病死率高[1]。sirtuin蛋白家族是近年来发现的一类烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依赖的组蛋白去乙酰化酶，包括沉默信息调节因子(SIRT)1～SIRT7。其中，SIRT3是线粒体内主要的去乙酰化酶，其在被线粒体基质加工肽酶切割后活化，全长SIRT3驻留在细胞核中，在相关因素(例如DNA损伤)影响下，SIRT3会迁移到线粒体内。SIRT3目前已知的功能包括参与细胞凋亡、能量代谢、热量限制、氧化应激等[2-6]。近年来，关于SIRT3在肿瘤发生、发展中的作用受到越来越多的关注。本研究在肝癌细胞株Huh-7中转染pc-DNA3.1质粒(对照)及SIRT3质粒，用细胞划痕实验和细胞侵袭实验来探索SIRT3基因过表达对肝癌细胞迁移能力和侵袭能力的影响。

1 材料与方法

1.1材料来源 人肝癌细胞株Huh-7来自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。

1.2仪器与试剂 蛋白质印迹法(Western blot)电泳仪、电转膜仪、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)扩增仪均购自美国伯乐公司；高速低温离心机购自德国艾本德股份有限公司；酶标仪购自美国Genecopoeia公司；DMEM培养基、胎牛血清、二甲基亚砜(DMSO)、青链霉素双抗购自美国赛默飞世尔公司；对照pc-DNA3.1质粒、构建在载体pc-DNA3.1上的SIRT3质粒购自美国Addgene公司；SIRT3引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；SYBR Green PCR反应混合液购自瑞士Roche公司；反转录PCR试剂盒购自美国伯乐公司；蛋白浓度检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；SIRT3抗体购自美国CST公司；辣根过氧化物酶标记二抗购自美国GE公司；……