刘淑芳

（辽宁农业职业技术学院 营口115009）

葡萄（Vitis vinifera L.）遗传背景比较复杂，育种周期较长，常规的育种方法在葡萄品种改良上受到明显的限制。随着生物技术的发展，将目的基因转入葡萄植株体内，可改良某些性状，从而提高育种效率，这为改良葡萄品种开辟了一条新的路径[1]，建立一个高效稳定的叶盘再生受体系统在农杆菌介导的遗传转化法中显得非常重要。为此，我们探讨了不同生长调节剂组合、培养基和暗培养对‘辽峰’葡萄叶片不定芽再生的影响，以期为建立一个高效、稳定的再生系统和基因转化体系提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

以葡萄品种‘辽峰’为试材。试验在辽宁农业职业技术学院农学园艺系组培实训室进行，试验时间为2018年3月至2020年12月。

1.2 试验方法

1.2.1 不同生长调节剂组合的筛选 按L16（44）正交试验设计（表1、表2），以MS为基本培养基，附加蔗糖30 g/L，琼脂7 g/L及水解酪蛋白（CH）0.25 g/L，pH 5.8。从苗龄35 d左右的‘辽峰’葡萄组培苗上剪取顶部平展幼嫩的叶片，横剪为0.5～1.0 cm2大小叶块，以叶背接触培养基。每个处理接种20个叶块，重复3次，接种后培养皿用‘Parafilm’密封。

1.2.2 基本培养基对‘辽峰’叶片不定芽再生的影响分别以1/2 MS、MS、WPM、NN69为基本培养基，附加筛选出的最佳生长调节剂组合，按前述方法接种‘辽峰’葡萄叶片。

1.2.3 暗培养对‘辽峰’叶片不定芽再生的影响 将叶片接种在筛选出的最佳生长调节剂组合和最佳基本培养基上，分别进行0、7 d、14 d和21 d的暗培养处理后，置于光下常规培养。

1.2.4 培养条件 培养温度（25±2）℃，光照度2 400～3 000 lx，光照周期16 h/8 h。……