切割小鼠X染色体的CRISPR/Cas9系统表达载体的构建及验证
2021-06-23谢绍怡蒋璐蔓杨晓峰张仙玉吴珍芳李紫聪
生物技术通报 2021年5期
谢绍怡 蒋璐蔓 杨晓峰 张仙玉 吴珍芳 李紫聪
(华南农业大学动物科学学院 国家生猪种业工程技术研究中心,广州 510642)
性别控制即利用人为手段,控制动物后代性别比例向人们所希望的方向偏移[1]。实现性别控制可以有效减少畜牧生产上原材料的浪费,提高经济效益;同时,对于拯救濒危动物、减少伴性遗传疾病的发生等具有重要意义。
在自然繁殖条件下,孟德尔分离定律决定动物后代性别比例为1∶1,而其外部环境的改变则影响着动物实际性别比围绕着1∶1的比例上下波动[2]。由于环境因素对性别决定的作用机制尚未明确,关于这方面的性控研究均存在着重复性差、性别偏移程度较低的问题[3-5]。相反,在人为控制后代的遗传物质方面,却能取得了很好的性控效果,如流式细胞仪分选X/Y精子技术。它是使用Hoechst33342染料结合精子DNA,利用了X/Y精子DNA含量的差异,识别其结合染料的荧光强度,从而对精液进行分选。研究表明,适当浓度的Hoechst33342染料对精子活力等不会造成显著影响[6],且使用分选后的精液进行人工授精其怀孕率、产犊数、初生重等与普通精液相比无显著差别[7]。目前最新的流式细胞仪每秒可以分离8 000个精子,其X精子的分离纯度可达到90%以上,Y精子纯度可达到85%以上[8]。然而,流式细胞仪价格昂贵,技术要求高,且其分选速率很难满足猪等单次输精量很大的动物人工输精量的要求,故该技术现今主要应用于牛、羊业的生产上,难以在其他动物上推广应用。……
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