付强 陈俊贞 郭妍婷 姚刚 冉多良 史慧君

（新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐 830052）

牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）是引起牛病毒性腹泻/黏膜病（Bovine viral diarrhea/mucosal disease，BVD/MD）的主要病原［1］，主要感染牛、羊和驼科动物，感染后常呈现体温升高、腹泻、黏膜充血及蹄叶炎等临床症状［2］。此外，BVDV还会引起母牛流产、死胎及牛群持续性感染，给牛群健康管理造成危害［3］。BVDV可通过血液、排泄物等途径水平传播，感染BVDV的牛发病率高、病死率低；还可以通过怀孕母牛垂直传播，感染孕牛产下的犊牛终身带毒，持续排毒，是重要传染源，同时也是生物制品、冻精、血清等主要污染源，BVDV是反刍动物最严重的病原体之一，会对养牛业造成严重的经济损失，危害极大［4］。探明该病毒胞内复制的关键因子途径将为BVD的诊断和防控提供理论依据［5］。

α2抗纤溶酶（serpin peptidase inhibitor clade F member 2，SERPINF2）是编码丝氨酸蛋白抑制剂SERPINF2家族的一员［6］。这个分子在1969年由Aoki等［7］发现，其主要的功能是能够有效抑制纤溶过程，1976年Moroi和Aoki［8］从人血浆中成功分离并鉴定了这个纤溶抑制剂。因为它能够迅速抑制纤溶酶活性并且免疫电泳迁移速度与α2球蛋白相当，因此命名为 α2-plasmin inhibitor［9］。

本课题组前期使用BVDV TC株感染Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal，ICC）建立转录组差异表达谱，发现SERPINF2基因表达量显著性上调［10］，该基因是否是BVDV胞内复制的关键因子，对BVDV的胞内复制有何影响尚未见研究。本研究应用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除SERPINF2基因，研究SERPINF2基因对BVDV复制的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病毒、质粒及细胞 BVDV新疆分离株TC由新疆农业大学传染病实验室冉多良教授惠赠［11］；……