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猪δ冠状病毒S1-CTD的截短表达及间接ELISA抗体方法的建立

2021-06-23瞿欢李成陈汭廖艺杰曹三杰文翼平颜其贵黄小波

生物技术通报 2021年5期
关键词:血清检测方法

瞿欢 李成 陈汭 廖艺杰 曹三杰,2,3 文翼平 颜其贵 黄小波,2,3

(1.四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都 611130;2.农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站,成都 611130;3.四川农业大学国家级动物类实验教学示范中心,成都 611130)

猪 δ冠 状 病 毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新型猪肠道冠状病毒,主要引起哺乳仔猪呕吐、腹泻脱水和死亡[1]。2012年 Woo等[2]用全基因组测序首次报道了PDCoV的存在。2014年,PDCoV在美国猪群快速传播流行,成为感染普遍的腹泻病原[3-4]。至今,PDCoV已在全球多个养猪国家和地区(加拿大[5]、中国[6]、韩国[7]、泰国[8]、日本[9]等)被报道。回溯调查发现,PDCoV最早在2004年我国猪腹泻样本中就已经存在[10]。目前,我国大部分省份均存在PDCoV感染,且与其他猪肠道病原共感染的现象也较普遍[10-12]。

PDCoV是一种有囊膜的单股正链RNA病毒[13],基因组3′端主要编码病毒的结构蛋白,依次包括表面纤突蛋白(S)、小膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)[14]。Shang等[15]用冷冻电镜技术解析了S蛋白的三维结构与功能:S蛋白由非共价连接的S1、S2两部分组成,S1包含N末端结构域(NTD)和C末端结构域(CTD),两者都能够作为受体结合区域(receptor bingding domain,RBDs),而S1-CTD被认为是主要的RBD,并被证实是优势抗原表位区[16];S2能介导宿主和病毒的膜融合。其他冠状病毒的研究表明S是最早刺激机体产生中和抗体的主要结构蛋白[17-18]。Carvajal等[19]发现感染猪流行性腹泻病毒(PEDV)的猪血清中S蛋白抗体比N蛋白抗体更持久,因此S蛋白有最佳的抗原性。

目前对于PDCoV主要包括病原学和血清学诊断。病原学诊断方法如RT-PCR、原位杂交、电镜、免疫组化等不适合大规模疫病普查。……

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