刘玉侠，齐 红，段北野，付 尧，夏 莉，于 鸿，王 斌*

(1.吉林省肿瘤防治研究所,吉林 长春130012;2.吉林省肿瘤医院；3.吉林省人民医院)

胃癌是消化道恶性肿瘤之一，在我国发病率和死亡率均较高[1-2]。目前胃癌的治疗还是以手术为主，辅以术后化疗及靶向治疗。在化疗过程中，很多人会对化疗药物产生耐药，从而影响治疗效果。为了探求肿瘤细胞的耐药机制以及为耐药肿瘤治疗的研究提供实验模型，本实验采用顺铂反复冲击的方法建立人胃癌细胞SGC-7901耐药细胞模型，为研究化疗耐药机制及治疗等奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试剂及器材IMDM培养基，Gibco产品；DMEM培养基，Hyclon产品;MTT(噻唑蓝)，Sigma产品；胎牛血清，天津TB公司；DMSO(二甲基亚砜)，Sigma产品；顺铂，江苏豪森药业股份有限公司；琼脂糖，DNA标准品，宝泰克公司产品；低温低速离心机，SORVALL RTT USA；全自动酶标仪，Labsystems Dragon；电泳仪,上海天能。

1.2人胃癌细胞株SGC-7901,吉林省肿瘤防治研究所保存。

1.3 实验方法

1.3.1培养人胃癌细胞株SGC-7901 将液氮冻存的SGC-7901细胞取出复苏后，离心洗涤，加入含10%FCS的DMEM培养液的培养瓶中，置于37℃,5%CO2培养箱饱和湿度下培养。

1.3.2诱导SGC-7901细胞耐药 SGC-7901细胞培养至指数生长期，加入终浓度为50 μmol/L顺铂，冲击1 h后弃去含顺铂培养基，更换为新鲜配制的含10%FCS的DMDM培养液继续培养，每天观察细胞生长状态，待细胞长满时，用0.25%胰酶消化传代。传代后细胞长满瓶底时用同样浓度的顺铂同样方法冲击.如此反复，体外连续培养、冲击、传代，并反复冻存，复苏，观察细胞株生长稳定性，同时进行抗药性检测。

1.3.3细胞抗药性(抑制……