李 晔，孙仁义，吕 明，王鹏云

（淄博市中心医院创伤骨科，山东 淄博 255036）

人骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）是组织工程领域重要的种子细胞之一。目前，BMSCs向成骨细胞诱导技术多采用三维结构为细胞分化创造适宜的微环境，但存在诱导周期长、诱导后细胞性质不均一等弊端［1］。因此，探讨BMSCs成骨分化及调控机制有重要意义。BMSCs向成骨分化受多种基因调控。表观遗传学研究发现，组蛋白修饰、DNA甲基化、Hedgehog信号通路激活等过程与多能干细胞向成骨分化关系密切［2］。近年来研究表明，组蛋白乙酰化可促进BMSCs向成骨分化，组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）抑制剂可通过抑制HDAC2参与调控骨髓干细胞向成骨分化过程［3，4］。另研究表明，Hedgehog信号通路与骨形成关系密切，该信号通路的激活可促进BMSCs向成骨分化［5］。目前，关于调控HDAC2对BMSCs向成骨分化影响的报道尚少，为此，本研究通过体外分离大鼠BMSCs，并应用RNA干扰技术抑制HDAC2基因表达，探讨其是否通过Hedgehog信号通路参与调控BMSCs向成骨细胞分化过程，为骨组织缺损体内修复提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康SPF级雄性Wistar大鼠5只，4周龄，体质量90～110 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK（京）2017-0014。

1.2 大鼠BMSCs分离培养及鉴定

脱颈处死大鼠，取股骨、胫骨，DMEM-L完全培养基反复冲洗骨髓腔获得骨髓腔细胞，37℃、5% CO2、饱和湿度下培养5 d，更换培养基，去除未贴壁细胞，每3 d换液1次，收集传至第3代细胞进行流式细胞术鉴定免疫表型，取符合BMSCs生物学特征的细胞进行后续实验。

1.3 细胞分组及转染处理

取第……