恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒稳定复制细胞系的转录组学分析

2021-06-19张孝璐杨兰孙岩松徐东平李晓峰刘妍李浩

解放军医学杂志 2021年5期

张孝璐，杨兰，孙岩松，徐东平，李晓峰，刘妍*，李浩*

1病原微生物生物安全国家重点实验室，军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所，北京 100071；2解放军总医院第五医学中心感染病医学部，北京 100039

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是引起急性及慢性乙型肝炎的重要病原体[1]。全世界约有2.91亿人感染HBV，每年约有100万人死于HBV引发的肝硬化或肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，占全球肝癌患者总数的50%以上[2]。为研究HBV的感染机制及生物学特性，近年来研究者们已建立了多种稳定表达HBV病毒颗粒的细胞系，如HepG2.2.15细胞系[3]、HepAD38细胞系[4]、Huh7.93细胞系等[5]。经典的HepG2.2.15细胞系已经建立30余年，其宿主基因与原始HepG2细胞有很大差别，而这种差别可能是由于宿主基因组突变长时间累积导致的。2011年，Liu等[6]基于我国流行的C基因型恩替卡韦(entecavir，ETV)耐药HBV病毒株，建立了HBV稳定复制细胞系HepG2.A64(CCTCC C 201163)，维持在含380 μg/ml遗传霉素(G418)的高糖DMEM培养基中，可持续44个月以上产生乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)及HBV DNA。由于该细胞系可产生更多的病毒标志物及HBV cccDNA，且更易于培养及转染，已成为研究耐药HBV感染机制、生物学特性、药物疗效、治疗方案、新药及疫苗的又一个相对理想的模型。然而目前针对HBV稳定转染的HepG2.A64细胞系转录组层面的研究尚少见。本研究利用高通量转录组测序技术，对HepG2细胞与恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒(ETV-r HBV)稳定转染的HepG2.A64细胞转录组测序数据进行对比分析，探讨HBV稳定转染对宿主细胞DNA修复相关基因表达的影响。