陈健佳,张小梅,马文斌,黄玉梅,赵 强

(广州医科大学附属顺德医院心内科,佛山 528315;*通讯作者,E-mail:326400975@qq.com)

心肌炎是一种会导致心脏功能障碍的心肌炎症性疾病,病因包括免疫损伤、感染等,可显著影响心脏的收缩和舒张功能,导致心律失常[1]。心肌炎的诊断主要依赖于免疫学、免疫组织化学及组织病理学[2]。心肌炎的具体发病机制目前并不明确,探究心肌炎的分子靶向治疗具有重要意义。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类超过200个核苷酸组成的内源性小分子RNA,属于单链非编码RNA[3]。lncRNA参与调控血管生成、细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡等各种细胞功能[4,5]。lncRNA广泛参与各种心脏疾病的发生、发展过程[6]。研究表明,OIP5-AS1是一种lncRNA,其可通过抑制线粒体介导的细胞凋亡,降低急性心肌梗死后的心肌缺血再灌注损伤[7]。OIP5-AS1对细菌性心肌炎时心肌细胞损伤的研究尚未见报道。本研究旨在观察OIP5-AS1对脂多糖诱导细菌性心肌炎时对大鼠原代心肌细胞的作用及可能的作用机制。

1 材料和方法

1.1 细胞与试剂

用于分离原代心肌细胞的3 d新生SD大鼠购于武汉万千佳兴生物科技有限公司。载有OIP5-AS1序列的GFP慢病毒、空载GFP慢病毒、miR-NC、miR-181d-5p、OIP5-AS1野生型及突变型荧光报告载体购于广州锐博生物技术有限公司。工具293细胞、ELISA试剂盒和CCK-8试剂盒购于上海碧云天生物科技有限公司。胎牛血清、DMEM培养基购于美国Hyclone公司。Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡检测试剂盒购于美国BD公司。双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于上海翊圣生物科技有限公司。转染试剂LipofectamineTM3000购于美国Invitrogen公司。……