吴树全,王生兰

(1青海省第五人民医院急诊科,西宁 810000;2青海大学医学院病理生理学教研室)

肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是一种弥漫性肺微血管重塑疾病,伴有肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)恶性增殖,导致持续的肺动脉压升高,右心室肥大和死亡[1,2]。血管重塑是PAH的关键病理特征,其中PASMCs异常增殖是肺动脉血管重塑的主要机制,但目前针对肺血管重塑的疗法在逆转PAH方面效果仍不佳[3],因此,积极地探索调控PASMCs增殖的分子机制可能有助于改善PAH的临床治疗效果。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种多效性细胞因子,与细胞增殖密切相关[4]。另有研究证实,OPN可能参与特发性和低氧性肺动脉高压的发病机制,其上调可能有助于PASMCs增殖,但其具体分子机制尚不清楚[5]。CD44是一种广泛表达的选择性剪接、翻译后修饰的跨膜糖蛋白,在调节细胞存活、维持功能性血管屏障和血管生成中至关重要[6]。然而,OPN在低氧诱导下对人PASMCs(human PASMCs,HPASMCs)细胞增殖的影响及其作用机制是否与CD44相关未见报道。因此,本研究选择体外培养HPASMCs细胞,模拟低氧环境,探讨OPN/CD44通路对HPASMCs细胞增殖的影响,以期为临床PAH治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器

1.1.1 主要材料 HPASMCs(3110)购自上海中乔新舟生物科技有限公司;SMCM培养基(1101)购自北京裕恒丰科技有限公司;OPN-siRNA及OPN-siRNA阴性对照(negative control-siRNA,NC-siRNA)序列由吉玛基因公司构建。DMEM培养基(11995)、PCR试剂盒(RP1100)、胰酶消化液(T1350)、Trizol试剂盒(R1100)、RIPA裂解液(R0020)、逆转录试剂盒(T2210-200T)、ECL发光液(PE0010)购自北京Solarbio公司;OPN、CD44及β-肌动蛋白(β-actin)引物序列由上海生工生物工程有限公司设计合成;增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)(13-3900)、Cyclin D1(33-3500)、Cyclin E(MA5-14336)、p27(MA5-12835)、OPN(MA5-17180)、CD44小鼠抗人单克隆抗体(MA5-13887)、山羊抗小鼠IgG(H+L)二级抗体(A32723)购自美国Thermo Fisher Scientific公司。……