侯琛

（天津医科大学肿瘤医院/国家肿瘤临床医学研究中心/天津市“肿瘤防治”重点实验室/乳腺癌防治教育部重点实验室，天津 300060）

乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，具有较高的发生率和病死率[1]。肿瘤转移是导致乳腺癌患者发生转移的主要原因[2]，其中以骨转移最为常见，严重影响患者的生活质量。Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2，RUNX2）能够促进成骨细胞分化与形成[3]，参与调节细胞外基质（ECM）重塑相关基因转录[4-5]，其高表达与乳腺癌骨转移密切相关[6]。基质金属蛋白酶3（matrix metalloproteinase 3，MMP-3）作为RUNX2的靶基因，可以降解多种ECM底物[7]，在肿瘤侵袭、转移中起促进作用[8]。

早期研究发现RUNX2可调节MMP家族成员的表达，如MMP-9、MMP-13[9-10]，但有关RUNX2调节乳腺癌中MMP-3表达的研究非常有限。本研究将进一步探讨RUNX2表达水平对MMP-3基因转录的影响及其机制，为乳腺癌的靶向治疗研究提供潜在的理论基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

乳腺癌细胞MDA-MB-231、BT-549和人胚胎肾上皮细胞293T购于ATCC细胞库；Opti-MEM、胎牛血清、RPMI-1640以及DMEM高糖培养基购于美国Gibco公司；Lipofectamine 2000、逆转录试剂盒以及Platinum Quantitative PCRSuperMix-UDG试剂盒购于美国Invitrogen公司；氨苄青霉素购自上海生工公司；RUNX2、MMP-3抗体购于Santa Cruz公司，β-actin抗体购于美国Abcam公司；T4DNA连接酶、限制性内切酶Hind III酶、Xho I酶、GeneJETPlasmid Miniprep Kit试剂盒和GeneJETGel Extraction试剂盒购于美国Thermo公司；感受态细胞DH-5α、PrimeSTARMax DNA Polymerase、DNA Marker购自日本TaKaRa公司；Dual-Luciferase Reporter Assay System购自Promega公司；染色质免疫共沉淀试剂盒购自美国Millipore公司。

1.2 RUNX2 和MMP-3 基因靶向关系以及无远处转移生存（DMFS）的生物信息学预测

利用cBioPortal数据库（http://www.cbioportal.org）根据Breast Cancer（METABRIC,Nature 2012 &Nat Commun 2016）数据集分析1902例乳腺癌患者组织中RUNX2和MMP-3 mRNA水平间相关性；在Kaplan Meier Plotter数据库（http://kmplot.com/analysis）中下载乳腺癌患者基因表达数据及生存信息，分析基因表达谱与预后间关系（http://kmplot.com/analysis）；……