张 菶，邹 伟

(1.黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040)

脑出血(Intracerebral hemorrhage, ICH)后血肿、水肿与炎症等病理反应参与了神经细胞凋亡过程，而神经细胞大量凋亡是ICH后神经功能缺损的重要原因之一[1-2]。作为在动物胚胎期决定各种前体细胞分化并参与多种组织器官生长发育的重要通路，Shh通路在成体动物生理及病理条件下，在抑制神经细胞凋亡方面发挥着重要功能[3]。“百会”透“曲鬓”针刺法作为临床治疗脑卒中的常用方法，在改善脑卒中后神经功能缺损方面发挥着重要作用，目前已有研究发现针刺头穴可抑制脑卒中后神经细胞凋亡[4]，但该针刺法在ICH后是否可发挥相似作用以及通过何种机制达到这一效果仍待进一步研究。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 75只体质量(250±20)g雄性SD大鼠，购于黑龙江中医药大学实验动物中心[动物许可证号:No.SCXK(Heilongjiang)2013-004]。人工饲养于室温20 ℃、相对湿度50%和光照12 h(7:30—19:30)的环境，每日适量进水进食，造模前12 h禁水禁食。本实验获黑龙江中医药大学动物伦理委员会批准(IACUC:2019-05-13-01)，且遵照《实验动物使用与护理指南(2011年,第8版)》[5]执行。

1.1.2 仪器 针灸针(0.3 mm×25 mm,华佗牌,中国);牙钻(Strong90,世新,韩国);立体定位仪(68001,RWD,中国);组织包埋机(TES99,MEDITE,德国);石蜡切片机(HM355S,Thermo Fisher Scientific,美国);光学显微镜(BX53,Olympus,日本);病理图像分析系统(Motic Med6.0,麦克奥迪,中国);低温冷冻离心机(Fresco17,Thermo Fisher Scientific,美国);酶标仪(MultiSkan3,Thermo Fisher Scientific,美国);电泳仪(Powerpac Universal,Bio-Rad,美国);NC膜(0.45 μm孔径,Millipore,美国);凝胶成像分析系统(GelDoc XR+,ProteinSimple,美国)。

1.1.3 试剂 PBS(P1010,Solarbio Technology,中国);Smo一抗(ab113438,Abcam,美国);Gli1一抗(ab151796,Abcam,美国);Smo和Gli1二抗(S004F,TDY Biotech,中国);10×Tris-Glycine-SDS电泳缓冲液(P0014C,Beyotime Biotechnology,中国);上样缓冲液……