范一灵，王淑娟，李琼琼，胡 颖，宋明辉，秦 峰,4，刘 浩，杨美成,*

（1.国家药品监督管理局药品微生物检测技术重点实验室，上海市食品药品检验研究院，上海 201203；2.中国食品药品检定研究院，北京 102629；3.遵义医科大学公共卫生学院，贵州 遵义 563006；4.复旦大学化学系，生物医学研究院，上海 200438）

产志贺毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-producingEscherichia coli，STEC）是一类可引起人类腹泻、肠出血、溶血性尿毒综合征、肾衰竭、溶血性贫血以及死亡的食源性致病微生物[1]，可存在于水体、植物、动物尤其是反刍动物体内[2]。食品中低于100 CFU的STEC菌体就可能导致人类患病[3]。STEC共有超400 种血清型[4]，在非O157:H7血清型的产志贺毒素大肠埃希菌（Non-O157 STEC）中，有6 种被认为是检出率最高、危害较大的菌株，分别是O26（22%）、O111（16%）、O103（12%）、O121（8%）、O45（7%）和O145（5%）[5-6]。美国疾控中心发布的数据显示，2016年美国有5 441 例经确认的STEC感染事件[7]，预估有超过26万 名患者，导致30 人死亡[8]。

目前，检测STEC的主要分子靶点是编码志贺毒素的stx基因。该基因主要分为stx1和stx2基因两类[9-10]。其中，stx1基因有3 个亚型，分别为stx1a、stx1c、stx1d；而stx2基因的亚型较多，常见的亚型有stx2a到stx2g共7 种亚型[9,11]。国际上主要采用实时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）[12-14]对其进行检测，其中使用较广的国际标准化组织（International Organization for Standardization，ISO）和美国农业部（United States Department of Agriculture，USDA）方法也采用该技术对疑似含STEC的增菌培养物进行初筛[15-16]。然而，real-time PCR方法需要温度在50～100 ℃间不停变化，对相关检测设备要求较高，无法便携携带，较难满足基层实验室和现场快速检测的需求。

近年来，以恒温方式扩增目标核酸的方法被逐步应用于微生物检测领域，给致病菌的核酸快速检测提供了更多选择。……