朱亮华 袁文霄 金蕊

哮喘是一种慢性呼吸道疾病，全球发病率逐年增高，特别是儿童[1]，其发病有多基因参与[2]。喘息是婴幼儿多见的呼吸道症状，部分哮喘是由反复喘息发展而成的，两者关系密切[3]。与儿童哮喘起病最密切相关的易感基因是ORMDL3，它通过调节鞘脂类的合成、T淋巴细胞活化和诱导产生多种细胞因子参与哮喘的发病[4-6]。目前，发现了ORMDL3的一些剪接异构体。我们查找了在GENEBANK上发表的ORMDL3的剪接异构体(AK093063.1)，我们定义为ORMDL3-v1，该剪接异构体是在睾丸组织中发现的。为了了解这个剪接异构体与反复喘息的关系，本研究首先在反复喘息患儿外周血中通过5′-RACE实验，鉴定了这个剪接异构体的存在，随后检测了反复喘息患儿ORMDL3-v1及其野生型ORMDL3的表达水平，探讨其在儿童反复喘息中的作用。

资料与方法

一、临床资料

选取2017年06月至2019年06月在我院儿科住院的小于5岁的反复喘息患儿48例，其中特应性喘息A组(喘息A组)28例(其中至少有对食物或药物过敏，变应性鼻炎和湿疹之一)，非特应性喘息B组(喘息B组)20例。反复喘息定义为生后至少3次及以上喘息发作，并排除早产、重症肺炎和支气管异物等病史。4周内无呼吸道感染及特应性病史的为正常对照组(32例)，收集外周血检测。我院伦理委员会批准了该项目[(2008)伦审第(1102)号]，患儿父母均签署知情同意书。

二、材料

pMD18-T载体、RT-PCR和5′ RACE试剂盒(TaKaRa，大连)，感受态大肠杆菌 DH5α(QIAGEN，德国)。

三、方法

1 5′ RACE实验

收集一例反复喘息儿童(喘息A组中的一例)外周血250 ul(第一天入院)，按照工具包手册中描述的步骤提取总RNA。……