许桐彤 徐振健 陈丽玲 陈秋菊 徐安平

调节性T 细胞（regulatory T cells，Tregs）是一类具有负向免疫调节功能的T 细胞亚群，因Tregs能调节机体免疫反应而被应用在众多疾病的研究中，如自身免疫性疾病、炎症性疾病和肿瘤等。根据来源，Tregs 可分为自然调节性T 细胞（natural regulatory T cells，nTregs）和诱导调节性T 细胞（in⁃duced regulatory T cells，iTregs）。nTregs 主要来源于胸腺，iTregs 是由外周幼稚T 细胞在抗原的刺激下转化而来，二者均通过关键转录因子FoxP3 来调节机体免疫反应。在正常的情况下，nTregs 与辅助性T 细胞（helper T cells，Th）协同维持机体正常的免疫反应。然而，在免疫炎症反应情况下，这种平衡可能会被打破，出现Th 数量增多和功能增强，进而可导致nTregs 的功能不稳定［1，2］。另外，多项研究表明在免疫炎症状态下，nTregs 可能表达与辅助性T 细胞（Th17）分化相关的转录因子RORγt（retinoic acid⁃related orphan receptor⁃γt）［3，4］，即RORγt+nTregs。RORγt+ nTregs 被认为是处于向促炎型Th17 分化的过渡阶段。这提示我们nTregs 在免疫炎症状态下的功能可能不稳定，甚至可能具有促炎作用。

许多疾病都存在缺氧的病理生理过程。病理性缺氧是引起免疫炎症反应的常见原因［5］。说明缺氧与免疫反应密切相关。在本研究中，我们通过体外缺氧来模拟组织缺氧环境，进而研究缺氧对nTregs 中转录因子的表达情况以及对nTregs 功能的影响。

1 材料与方法

1.1 主要材料 实验所用C57BL/6 小鼠购于广东省实验动物中心；分选nTregs 所用试剂购于德国MiltenyiBiotec；流 式 抗 体FITC anti⁃mouse CD3e、perCP⁃cy5.5 anti⁃mouse CD4、PE anti⁃mouse CD25、BV421 anti⁃mouse FoxP3 以及流式细胞仪均购买自美 国BD 公 司；westernblot 所 用STAT3 抗 体、p⁃STAT3 抗体、RORγt 抗体购自英国Abcam 公司，GAPDH 抗体购自美国Cell Signaling Technology 公司；CFSE 试剂购于美国Biolengend 公司；缺氧模型所需培养箱购自德国Eppendorf 公司；常氧培养箱购于美国Thermo Fisher Scientific 公司。……