阿魏酸通过调控JAK2/STAT6免疫信号通路抑制肺癌细胞增殖和转移①
2021-05-26郭风赵瑞敏李景亮刘源溪杨淑娟禹州市中医院肿瘤内科禹州461670
郭风 赵瑞敏 李景亮 刘源溪 杨淑娟(禹州市中医院肿瘤内科,禹州 461670)
目前,肺癌在我国处于高发状态,且发病率逐年上升[1]。作为一个全球医疗领域的研究热点问题,目前针对肺癌的研究已有很多,但对肺癌治疗有效的药物仍然很少[2]。肺癌发生的分子机制十分复杂,致病因素多样,导致其具有较高发病率[3]。国内外对肺癌的药物研发已有很多,但阿魏酸作为传统中药阿魏和川芎的提取物[4],其对肺癌的作用研究相对较少。目前有研究表明,传统中药阿魏(feru-lic acid,FA)和川芎具有很好的抑癌作用[5],但是具体的抑癌成分尚不十分清楚,阿魏酸作为阿魏和川芎的提取物在抑癌作用中起到什么作用,同样没有报道。因此本研究以阿魏酸为研究对象,观察其对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用,同时对其作用的分子机制做了初步探讨。
1 材料与方法
1.1 材料A549细胞购自郑州大学细胞库;阿魏酸单体购自河南省食品药品检验所;蛋白定量试剂盒、SDS凝胶试剂盒、细胞裂解液购自北京碧云天;结晶紫、高锰酸钾、草酸、冰醋酸购自郑州马基森生物科技有限公司;蛋白酶抑制剂购自罗氏试剂生物有限公司;DMEM培养液、胎牛血清、胰蛋白酶消化液、青 链 霉 素购 自HyClone;β‐actin/COX‐2、Sur-vivin、XIAP、p‐53抗体购自Abcam。
1.2 方法
1.2.1 CCK‐8增殖实验A549细胞4×105个/孔铺板,细胞密度达到80%左右,不同浓度阿魏酸处理48 h。结束后每孔加入20µl CCK‐8试剂,避光3 h,摇床振荡15 min。酶标仪450 nm检测细胞CCK‐8混合液OD值进行活力分析。
1.2.2 qRT‐PCR A549细胞4×105个/孔直接铺板,细胞密度达到80%左右,给予10 ng/ml TGF‐β1刺激24 h,随后不同浓度阿魏酸给药处理48 h,严格按照试剂盒说明步骤进行提取、定量、反转录和PCR反应。……
