郑 丹 赵笑芸 申达月 张曦澜 李元平 廖 晖

（山西医科大学附属人民医院药学部，太原030012）

红花具有活血通经、祛瘀止痛的功效，羟基红花黄色素A（hydroxysafflor yellow A，HSYA）是红花的主要活性成分，在抗炎、抗肿瘤、抗氧化等方面发挥重要的药理作用［1-2］。课题组前期研究发现，含有HSYA的红花提取物能够抑制脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞产生一氧化氮（nitric oxide，NO）及IL-1β［3］。

巨噬细胞是重要的免疫细胞，在机体内发挥防御、监视、调节、提呈抗原及清除病原体和介导炎症反应的作用。巨噬细胞在不同情况下可以转化为M1、M2等不同表型，在炎症反应中分别发挥损伤及保护的不同作用［4］。在LPS、高糖等的诱导下，巨噬细胞向M1型转化增加，IL-1β、TNF-α等炎症因子大量产生，同时M2型减少［5］。

本研究利用高糖作用于巨噬细胞［6］，观察M1型极化的标志物TNF-α、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）及M2型极化标志物CD206、精氨酸酶-1（arginase-1，Arg-1）蛋白表达的变化，探究HSYA对高糖诱导的巨噬细胞表型转化及NO、IL-1β等炎症因子的影响作用。

1 材料与方法

1.1 材料 小鼠巨噬细胞系RAW264.7为Absin生物技术公司（中国上海）提供。RPMI1640培养基、双抗（Gibco）；胎牛血清（FBS）、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液5×（变性）、Western blot膜再生液、兔抗Arg-1、兔抗iNOS、兔抗CD206、兔抗TNF-α购于武汉博士德生物工程有限公司；HSYA购于中国食品药品检定研究院；二甲基亚砜（DMSO）、LPS、葡萄糖（D-glucose）、RIPA组织细胞裂解液、ECL Plus超敏发光液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒购于北京索莱宝公司；GAPDH，山羊抗兔二抗，山羊抗鼠二抗均购于武汉三鹰生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 巨噬细胞培养 小鼠巨噬细胞系RAW264.7培养于含有10%FBS、100 U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640完全培养基，置于37℃、5%CO2培养箱中贴壁生长。……