孟娜, 顾悦, 孔瑞芹, 王瑛璞

1河南科技大学第二附属医院眼科(河南洛阳 471000)； 2西安医学院第二附属医院眼科 (陕西西安 710038)

糖尿病性白内障(diabetic cataract, DC)是糖尿病患者致盲的一个重要因素。糖尿病患者血糖浓度始终处于异常高水平状态，长期的高糖环境引起晶状体上皮细胞(lens epithelial cells，LECs)的氧化应激损伤是高糖环境下晶状体浑浊的主要原因之一，细胞内过量的ROS及晶状体内抗氧化物酶失活，导致晶状体细胞抗氧化能力下降。是引起糖尿病患者视力低下的主要原因[1-2]。miRNA是一类内源性非编码单RNA分子，可通过调控下游靶基因的转录和翻译进而参与白内障发生及发展过程[3]。近年来发现多种miRNA在LECs的氧化应激损伤中发挥作用，参与白内障的发生、发展[4-5]。miR-211是miRNA家族成员，有研究发现，miR-211在白内障患者晶状体组织中呈高表达，且能促进LECs的凋亡[6]。2019年2—6月，本研究探讨miR-211对高糖诱导的LECs氧化应激的影响及其可能的作用机制，为白内障的防治寻找潜在靶点。

1 材料与方法

1.1 材料 永生型人LECs HLEC-B3细胞株(中国科学院上海细胞库)；含双抗的1640培养基、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(杭州四季青公司)；miR-211抑制剂(miR-211 inhibitor)和miR-211阴性对照(miR-211 NC)(上海吉玛基因公司)；LipofectamineTM2000(美国Sigma公司)；Trizol(杭州四季青公司)；SIRT1、FoxO3a一抗(美国Invitrogen公司)；山羊抗兔IgG(H+L)二抗(美国Sigma公司)总抗氧化能力(total-antioxidative capability, T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutas, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX)、还原型谷胱甘肽(glutathone, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)检测试剂盒(上海碧云天有限公司)。

酶标仪(美国 Biorad 公司)，实时定量PCR仪(美国ABI 7500)，电泳仪(美国Bio-Rad公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞复苏与培养 将HLEC-B3细胞株解冻、复苏，用含10%FBS和1%双抗的1640培养基重悬细胞，置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，每2～3 d用胰蛋白酶消化传代1次。……