龚 娅，段德令，何 雄，史秋霞，沈雪曼，余文凤

中国人民解放军南部战区总医院白云院区检验科，广东广州 510510

人乳头瘤病毒(HPV) 属乳头瘤病毒科，是环状双链DNA病毒，由病毒蛋白外壳及核心DNA物质构成。HPV具有嗜黏膜和皮肤上皮性的特点，多达100多种基因型，其中40余种可感染泌尿生殖系统，约20余种与肿瘤相关[1]。HPV根据其致病性分为高危型和低危型，每一型又包含多种HPV基因型，HPV感染后多数具有自限性，能自我清除，临床常无明显症状，不易被识别，对HPV的定期筛查是预防宫颈癌发生的有效措施。本研究采用聚合酶链反应(PCR)体外扩增技术与DNA反向点杂交法相结合的HPV基因分型技术对3 491例女性HPV不同基因型的检测结果进行分析研究，为本地区女性宫颈癌的早期防治提供参考依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2017年10月至2019年10月来本院妇科门诊就诊的女性共3 491例为研究对象，年龄16～81岁，平均37.2岁。

1.2标本采集 由临床医师将采样刷插入宫颈口采集宫颈脱落细胞，以宫颈口为中心，稍用力顺时针均匀旋转4～5圈，采样刷放在专用细胞保存液中，立即送检。

1.3检测方法 HPV基因型检测采用深圳亚能生物技术有限公司检测试剂盒及罗氏公司LC-480荧光定量PCR扩增仪，然后利用核酸分子快速膜杂交技术使目的分子与固定有DNA探针的低密度基因芯片薄膜发生快速杂交，根据芯片上23种HPV基因型分布的相应着色点判读结果，所有操作严格按照试剂说明书进行。其中18种高危型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83基因型；5种低危型HPV包括HPV6、11、42、43、81基因型。

1.4统计学处理 采用Excel2013统计软件建立数据库，并进行数据处理。

2 结 果

2.1不同年龄组女性HPV各基因型感染情况 3 491例女性中，18种高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83基因型的阳性率分别为4.15%、1.23%、0.95%、1.03%、0.80%、1.49%、0.43%、2.52%、7.53%、2.58%、1.72%、3.21%、1.98%、1.06%、2.58%、0.40%、0.26%、0.26%；5种低危型HPV6、11、42、43、81基因型阳性率分别为1.23%、0.72%、1.95%、1.72%、2.81%。不同年龄组女性部分HPV基因型感染情况见表1。

表1 不同年龄组女性部分HPV基因型感染情况[n(%)]

年龄(岁)n52型53型56型58型59型68型81型<2638541(10.65)8(2.08)11(2.86)16(4.16)13(3.38)12(3.12)12(3.12)26～<361 26697(7.66)34(2.69)23(1.82)27(2.13)28(2.21)35(2.76)16(1.26)36～<461 06769(6.47)29(2.72)13(1.22)34(3.19)14(1.31)19(1.78)29(2.72)46～5565046(7.08)13(2.00)6(0.92)25(3.85)12(1.85)17(2.62)27(4.15)>5512310(8.13)6(4.88)7(5.69)10(8.13)2(1.63)7(5.69)14(11.38)合计3 491263(7.53)90(2.58)60(1.72)112(3.21)69(1.98)90(2.58)98(2.81)

2.2不同年龄组HPV单一和混合感染情况 HPV总阳性率为28.59%，单一感染、二重感染、三重感染、四重感染、五重感染、六重感染、七重感染、八重感染的阳性率分别为19.31%、6.22%、1.98%、0.74%、0.20%、0.06%、0.06%、0.03%，不同年龄组单一和混合感染情况见表2。单一感染、二重感染、三重感染、四重感染、五重感染、六重感染、七重感染、八重感染在感染者中所占构成比分别为67.54%、21.74%、6.91%、2.61%、0.70%、0.20%、0.20%、0.10%。<26岁、26～<36岁、36～<46岁、46～55岁、>55岁5个年龄组女性阳性率分别为35.84%、27.09%、26.52%、27.85%、43.09%。

2.3不同HPV基因型混合感染 在3 491例女性中，23种HPV基因型感染中混合感染占比较高的为HPV35、45、66、6、82基因型，分别为75.00%、73.33%、70.27%、67.44%、66.67%。不同HPV基因型感染时其混合其他基因型感染频率前5位组合，见表3。

表2 不同年龄组HPV单一和混合感染情况[n(%)]

表3 不同HPV基因型混合感染情况

3 讨 论

人类是HPV唯一宿主，人体感染HPV后，经过潜伏期后可出现HPV大量繁殖，导致皮肤黏膜鳞状上皮增殖，几乎所有宫颈癌患者的病理标本中均可找到HPV高危型病毒[2]。有研究显示，超过75%的女性会在不同阶段感染HPV，HPV阳性率与年龄及性行为习惯密切相关，年轻且多性伴侣的女性阳性率较高，高峰年龄多在18～28岁，且多为一过性感染[3]。本研究结果显示，HPV总阳性率为28.59%，高于包细俭等[4]报道的阳性率(24.00%)，各地报道的HPV阳性率不尽相同，不同地区的阳性率差异可能与HPV检验方法的多样性有关，也可能因为不同地区感染高危因素不同所致。<26岁、26～<36岁、36～<46岁、46～55岁、>55岁这5个年龄组阳性率分别为35.84%、27.09%、26.52%、27.85%、43.09%，各年龄组HPV感染阳性率呈“U”型结构，年轻女性和绝经期女性阳性率明显升高，年轻女性性活跃程度是影响HPV感染的危险因素，而绝经期女性的HPV感染与此年龄段卵巢功能减退，激素水平下降，阴道微生物改变导致感染机会增加密切相关[5]。在<26岁年龄组中，HPV51型阳性率明显高于其他年龄组，>55岁女性HPV 52、58、81型阳性率明显高于其他年龄组，各年龄组中不同的基因型阳性率不尽相同，但年轻女性免疫力较强，HPV感染往往为一过性，持续感染是宫颈癌发生的重要条件，因此，定期进行HPV基因分型检测，以便发现持续感染患者，是临床筛查和预防宫颈癌的有效手段，对预防宫颈癌的发生有重要价值。

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，该疾病发生率呈上升趋势，主要为HPV持续感染引起，尤其是高危型HPV感染患者宫颈癌发生率更高[6]。HPV的基因型较多，根据病毒的感染状态不同可分为单一感染和混合感染[7]；不同基因型的HPV其编码外壳蛋白的基因存在较大变异，不同基因型的HPV相互间不产生交叉保护抗体，因此，常出现不同型别HPV的混合感染或交叉感染情况[8-9]。本研究结果显示，在998例HPV感染患者中，单一感染占67.54%，混合感染占32.46%，其中二重感染、三重感染、四重感染、五重感染、六重感染、七重感染、八重感染在感染者中所占构成比分别为21.74%、6.91%、2.61%、0.70%、0.20%、0.20%、0.10%。常见HPV感染基因型为HPV52、16、58型，与黄春优等[10]报道的常见基因型为HPV16型有所不同。HPV52型阳性占感染患者的1/4以上，尤其在混合感染患者中，多数基因型最常混合HPV52型感染，无论是单一感染还是混合感染，HPV52型在本地区均最为常见。近年来有相关研究显示，HPV52型在我国许多地区已上升为常见的感染型别[11-12]。然而，各基因型间的致病性不尽相同，原因可能为各基因型的感染形式不同。有报道指出，单一HPV持续感染可使宫颈癌的患病风险增加19.9倍，多重HPV持续性感染可使宫颈癌的患病风险增加31.8倍[13-14]。由此可见，单一持续感染和混合感染情况是宫颈癌发生的主要危险因素，是否说明HPV52型会引起宫颈癌发生率的上升还有待进一步研究。本研究结果还显示，23种基因型多重感染情况不尽相同，易发生混合感染的主要为HPV35、45、66型，分别有75.00%、73.33%、70.27%以混合感染形式存在，这些结果提示，在女性宫颈癌防治过程中，除HPV16、18型外，HPV52、35型等感染也应该得到足够关注，临床在治疗过程中可根据检验结果进行评估，及时采取必要的干预措施。

宫颈癌及其癌前病变受多因素影响，生物学因素在宫颈癌发病中的作用在近年来的研究中备受重视。HPV感染被公认为宫颈癌发病的确切病因，目前HPV的治疗并无特异性药物，通常以预防和改善自身免疫力为主，开展HPV检测和疫苗接种是预防宫颈癌最有效的措施。本研究结果显示，23种HPV基因型中混合感染占比较高的为HPV35、45、66、6、82型，分别为75.00%、73.33%、70.27%、67.44%、66.67%。在混合感染中，不同基因型混合感染的型别各有不同，其中与HPV16型混合感染常见的基因型依次为HPV52、58、56、51、31型，与HPV18型混合感染常见的基因型依次为HPV52、53、16、68、51型，与HPV52型混合感染常见的基因型依次为HPV58、68、51、53、81型，与HPV58型混合感染常见的基因型依次为HPV52、81、16、59、56型。表3结果显示，除HPV52基因型外的其他22种基因型，有18种HPV基因型与其混合感染频率最高，多重感染时多数基因型常混合HPV52型感染，各基因型混合感染组合模式各异。目前，已经上市的HPV疫苗有2价(HPV16、18型)、4价(HPV6、11、16、18型)、9价(HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58型)HPV疫苗。仅9价HPV疫苗有较广泛的预防作用，但其价格较昂贵，普通家庭较难承受，因此，尽快研制适合不同地区不同人群的多价HPV疫苗对降低HPV阳性率和宫颈癌的发病率具有重要意义。也有报道指出，HPV可能存在交叉免疫，在接种2价HPV疫苗的人群中，疫苗除对HPV16、18型感染有保护作用外，还对HPV35、52、58、68型有交叉保护作用[15]。

综上所述，广州地区女性泌尿生殖道HPV感染以HPV52、16、58型较为常见，混合感染时多数基因型最常混合HPV52型，各基因型混合感染组合模式各异，分析HPV感染特征对宫颈癌防治和疫苗研发、接种有重要价值。本研究对多重感染组合模式的统计分析对本地区的HPV疫苗接种人群提供了一定的参考价值，期待随着HPV疫苗研究的进一步深入，会有更多适合不同区域流行病学特点的普价HPV疫苗上市。