陈 庆 李海虹 欧伟宁 张 幸

1.广西壮族自治区玉林市第二人民医院肾内科，广西玉林 537000；2.广西壮族自治区玉林市第一人民医院质控科，广西玉林 537000；3.桂林医学院广西肿瘤免疫与微环境调控重点实验室，广西桂林 541100

肾癌恶性程度较高，化疗、放疗效果不好，且近几年国内外发病率呈上升趋势[1-2]。芒柄花黄素是一种异黄酮类植物雌激素，其能调节分子信号通路对肿瘤产生抑制作用[3-5]，但对人肾癌细胞786-O 的作用及机制却未见报道。本实验研究芒柄花黄素对786-O 细胞的抑制作用及机制，为肾癌的治疗寻找新的药物及思路。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

人肾癌细胞株786-O 购于中国科学院上海生命科学研究院；芒柄花黄素（货号：47752-25MG-F）购于美国Sigma 公司；RPMI-1640 培养基、胎牛血清购于美国Hyclone 公司；CCK8 试剂盒（货号：C0038）、Hoechst33258（货号：C1018）、V-FITC 凋亡检测试剂盒（货号：C1062M）购于上海碧云天研究所；PI3K 抗体（货号：PA5-86628）、P-PI3K 抗体（货号：PA5-38905）购于美国Thermo Scientific 公司；AKT（货号：sc-5298）、P-AKT抗体（货号：sc-377556）购于美国Santa Cruz 公司；CFX96 荧光定量PCR 仪、Universal HoodⅡ凝胶成像系统购于美国Bio-Rad 公司；FACSAria Ⅲ流式细胞仪购于美国Becton Dickson 公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 786-O 细胞于37℃、5%CO2的培养箱中，用含10%胎牛血清和1%双抗的RPMI-1640 培养基培养。

1.2.2 细胞分组 根据加入到786-O 细胞中的芒柄花黄素剂量（0、20、40、80 μmol/L）分为对照组（A 组）、芒柄花黄素低剂量组（B 组）、芒柄花黄素中剂量组（C 组）、芒柄花黄素高剂量组（D 组）。

1.2.3 CCK8 法检测细胞增殖情况 取对数生长期的786-O 细胞接种于96 孔板，浓度为5×103个/孔，加药分组，每组设3 个复孔。分别培养24、48、72 h 后，加10 μL CCK8 溶液避光孵育2 h，用酶标仪测吸光度（OD）值。细胞增殖抑制率=（1-药物组平均OD 值/对照组平均OD 值）×100%。……