lncRNA HOXD-AS1通过靶向miR-133a-3p调控PI3K/AKT/mTOR轴影响宫颈癌细胞增殖和凋亡

2021-05-23刘海娟谢锦霞

山西医科大学学报 2021年4期

关键词：检测

刘海娟,谢锦霞

(西安市人民医院妇产科,西安 710068;*通讯作者,E-mail:13629267550@163.com)

宫颈癌是常发病于女性的恶性肿瘤之一,发病率及死亡率高,且不断上升,严重威胁女性的健康,因此寻找新的宫颈癌治疗和诊断的分子标志物对于其临床具有重要意义[1,2]。长链非编码RNA(lncRNA)是长度大于200个核苷酸的RNA,随着高通量测序技术的发展,越来越多的lncRNA被报道在肿瘤组织中差异表达,并可调控肿瘤的增殖、转移及凋亡[3-5]。已有研究表明lncRNA HOXD-AS1在肿瘤的发展过程中发挥重要作用,可调控神经母胶质瘤、膀胱癌、前列腺癌[6-8],但是lncRNA HOXD-AS1在宫颈癌中的作用及调控机制尚无明确研究,本研究探究lncRNA HOXD-AS1对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及机制,旨在为宫颈癌的临床治疗提供帮助。

1 材料与方法

1.1 材料

人正常宫颈上皮细胞HCerEpic、人宫颈癌细胞HeLa和C33A购自中科院上海细胞库;MTT试剂购自Amresssco公司;细胞凋亡检测试剂盒(沈阳万类生物技术有限公司);Lipofectamine 2000转染试剂盒;双荧光素酶基因载体及双荧光素酶基因报告检测试剂盒(汉恒生物技术有限公司);qPCR试剂盒、cDNA合成试剂盒购自福麦斯生物技术有限公司;B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bax蛋白、分裂半胱氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)、磷酸化的PI3K(phospho-PI3K, p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,又称AKT)、磷酸化的AKT(phospho-AKT, p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)、磷酸化的mTOR(phospho-mTOR, p-mTOR)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)一抗,山羊抗兔二抗购自沈阳万类生物技术有限公司,cDNA Synthesis试剂盒及PCR试剂盒购自福麦斯生物技术有限公司,流式细胞仪购自美国Beckman公司。