流感病毒神经氨酸酶活性及型别鉴定酶联凝集素法的建立
2021-05-19曹海丹刘旭光王平赵丹红孙宇孙志伟杨红育李帅张雪梅吴业红
曹海丹,刘旭光,王平,赵丹红,孙宇,孙志伟,杨红育,李帅,张雪梅,吴业红
长春生物制品研究所有限责任公司,吉林长春130012
流感病毒表面含有两种糖蛋白,分别为血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)[1]。HA能够与宿主细胞表面唾液酸受体结合,随后感染细胞。抗HA中和抗体能够抑制病毒HA活性从而抵抗病毒感染[2]。HA是流感疫苗中的主要成分,其含量和活性已成为疫苗制备中的关键控制指标。NA是流感病毒表面上的另一种重要糖蛋白,其在病毒的成熟释放过程中发挥重要作用[3]。有研究表明,抗NA抗体能够阻止病毒通过黏液层渗透,阻止新生病毒颗粒从感染细胞中脱离,限制游离病毒颗粒感染新细胞的数量[4]。针对NA的免疫力可显著降低流感发病率和致死率,限制流感传染易感个体的机会[5]。据报道,人群中抗NA抗体水平与感染后康复及感染疾病程度相关[6]。由于人群对带有新型HA的流感病毒无免疫力,但人体可能在之前流感病毒流行时就已经对NA产生免疫力,从而抵抗病毒感染。因此,针对NA的免疫力在新型HA流感大流行期间可能起到极重要作用[7]。
WHO推荐采用硫代巴比妥酸(thiobarbithuric acid,TBA)检测流感病毒NA活性及型别鉴定[8],该方法是基于检测NA从胎球蛋白上裂解后的游离唾液酸数量,但存在大量使用危险化学品和操作复杂等缺点,限制了其在流感疫苗生产检定和流感病毒监测中的应用。最近发展起来的酶联凝集素测定法(enzyme-linked lectin assay,ELLA)也依赖于NA的唾液酸酶活性,但不检测游离唾液酸,而是检测NA裂解唾液酸后暴露的末端半乳糖[9-10]。……
