陈 琳周 知马 宁周 璟

(海南省妇女儿童医学中心生殖医学中心,海口 570206)

胎盘的形成对于哺乳动物怀孕至关重要,其形成需要对滋养细胞的精确调控[1]。 子宫内膜中的滋养层细胞经历母体蜕膜和子宫螺旋动脉的增殖,分化,凋亡和侵袭,从而参与血管重塑[2]。 滋养细胞功能异常与不良妊娠并发症密切相关,包括先兆子痫,其特征是出现高血压,蛋白尿和水肿,这将会严重损害孕产妇的健康和胎儿的成长[3]。 因此,滋养细胞功能的精确调节对于维持正常胎盘至关重要。 有证据表明胎盘miRNA 的异常表达与先兆子痫相关[4]。 miRNA 是小的非编码RNA,主要在转录后水平上对靶基因的表达产生负调控[5]。 miRNA在许多病理和生理过程(例如细胞生长和凋亡,器官发生和发育)中起重要作用[6]。 Pineles 等[7]发现子痫前期患者胎盘中miR-672-5p 表达异常。 但是miR-672-5p 的生理学功能仍然未知,其是否与细胞凋亡相关值得探索。 基于此,本研究使用大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞作为研究对象,旨在探讨mmumiR-672-5p 调控大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞凋亡的分子机制。

1 材料和方法

1.1 实验细胞

大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞购自procell(货号:CP-R182；批号:OI2HO3)。

1.2 主要试剂与仪器

Lipofectamine 3000 购自北京科博晟创生物科技有限公司(货号:L3000008；批号:367H-TCSE9P0)；大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞完全培养基购自procell(货号:CM-R182；批号:ZDJH23)；pmir-glo utr1 质粒购自广州基旦生物科技有限公司(货号:JD190929001M； 批 号: C6XHL7QALI)； mmu-miR-672-5p inhibitor、mmu-miR-672-5p mimics 均购自北京 擎 科 合 成；Zfp229、Zfp503、Slc4a5、Stk24、Tmem106b、Bax、Adgrb3、Tmem63b、Pmp22、Mroh2a、Dsn1、Pramef25、Naaladl2、Clk2、Stx16、Usp28、Clint1、Jph4、Msl2、Krtap8-1、Pkp2、Mllt3、Rai14 的siRNA 均由吉凯基因合成；Bax 过表达质粒通过大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的cDNA 克隆至pCDNA3.1 表达载体上。……