刘明宇， 李树红， 杨 娟， 林 昊， 杨 珂， 谭小千

（四川农业大学 食品学院，四川 雅安625000）

木瓜蛋白酶Papain 是一类半胱氨酸蛋白酶，由212 个氨基酸残基组成，并含有3 对二硫键。构成其三维结构的两个结构域之间形成一个缝隙，缝隙内含有酶的活性位点[2]，而半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Cysteine proteinase inhibitors，CPIs） 是一类蛋白质水解酶抑制因子，其分子活性中心含有半胱氨酸残基（Cys-His）活性基团。它的3 个疏水结构域构成了一个可外露的锲形结构边缘，与Papain 在结构上高度互补，进而专一地抑制Papain 的活性[3]。 因此，可在分离半胱氨酸蛋白酶抑制剂时，将Papain 作为配基，偶联在活化的载体上，如曾仲奎[4]等曾以Papain为配基纯化百合巯基蛋白酶抑制剂。

Cystatins 广泛存在于动物体内，属于CPIs 的一个类群，目前对鱼类Cystatins 的性质及应用研究尚有不足。 对鱼源Cystatins 的精准分离纯化是研究其酶学特性的前提；另一方面，本团队前期研究表明，鱼卵、皮、肝胰等加工废弃组织及鱼糜加工的废弃漂洗水[5-8]中存在大量Cystatins 活性。 有报道显示，鱼源Cystatin 在抑制鱼糜凝胶软化[9]、鱼片抑菌[10]和保鲜[11]等食品领域具有潜在的应用前景，但目前尚缺少对从鱼类废弃组织及漂洗水中回收Cystatin 的高效方法。

基于团队前期实验制备的重组鱼类Cystatins能专一高效地与Papain 结合[11]，作者所在实验室自制了亲和填料（CNBr-Papain-Speharose 4B）并以木瓜蛋白酶Papain 为配基，以对鲢鱼重组Cystatins 的吸附性能为评价指标， 测定了该填料配基偶联密度、稳定性、贮藏性能及重复性。 以鱼糜漂洗水为例，对该填料的CPIs 回收情况进行了验证。 该研究为今后探索精准分离、 高效回收鱼源Cystatins 的方法奠定了基础。……