李永真，王志慧,2，李 娜，宋 颖，韩正华，千新来，原志庆，陆漫漫，李思琦

(1.新乡医学院病理学系，河南 新乡 453003；2.新乡医学院第三附属医院，河南 新乡 453003；3.新乡医学院三全学院，河南 新乡 453003)

肿瘤内部缺氧是实体瘤的共同特征，是恶性表型发展的重要微环境因素。缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor，HIF)是介导细胞对缺氧反应的转录因子[1]。磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)信号通路对细胞凋亡、增殖、血管生成有重要的调节功能，对乳腺癌细胞的转移、化学治疗耐药也起着重要作用。有研究表明，磷脂酶C-ε通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MEK)/细胞信号调节激酶(cell signal regulated kinase，ERK)和HIF-1α途径调节前列腺癌的代谢和转移[2]。在卵巢癌中，盐诱导激酶2通过激活PI3K/Akt信号通路上调HIF-1α的表达，促进糖酵解[3]。HIF-2α为HIF家族重要成员，与HIF-1α在结构上有很大的一致性，而且二者识别并结合的DNA也相同，目前的文献对HIF-1α研究较多，对HIF-2α与肿瘤的关系研究相对较少。本课题组前期研究表明，HIF-2α在乳腺癌MCF-7细胞中高表达，并与乳腺癌增殖、侵袭和多药耐药的发生密切相关[4-5]，而PI3K/Akt和MEK/ERK1/2信号通路对缺氧诱导的乳腺癌MCF-7细胞中HIF-2α表达的影响尚不明确。本研究通过研究抑制PI3K/Akt和MEK/ERK1/2信号通路对乳腺癌MCF-7细胞中HIF-2α表达的影响，旨在为乳腺癌的治疗寻找新的途径。

1 材料与方法

1.1 细胞来源人低侵袭乳腺癌MCF-7细胞由中国科学院上海生命科学院细胞资源中心提供。

1.2 主要试剂和仪器氯化钴(cobalt chloride，CoCl2)购自美国Sigma公司，引物由上海英潍捷基贸易有限公司合成，HIF-2α兔抗人多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限……