罗昕 徐梓馨 周璀 徐铭益

MicroRNA(miRNA)是一类在人体中广泛分布非编码小RNA，有多种miRNA如miR-29a、miR-223等与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)疾病的进展有关[1-4]。肝细胞的脂质沉积及炎症反应是导致脂肪肝的核心环节[5，6]。本研究通过构建脂肪肝小鼠模型及脂肪肝细胞模型，了解在高脂环境下miR-194调控肝细胞脂质代谢及炎症反应的作用。

材料与方法

一、材料与试剂

实验小鼠购于上海斯莱克实验动物中心，LO2细胞系购于中科院上海细胞库。小鼠低脂饲料及高脂饲料均购于南通特洛菲实验饲料有限公司，胎牛血清、高糖DMEM培养基、0.25%胰蛋白酶购自美国Gibco公司，1%青霉素链霉素双抗溶液、棕榈酸、LipofectamineTM3000 脂质体转染试剂、Trizol试剂购自美国Invitrogen公司，TNF-α单克隆荧光抗体购自美国Abcam公司，PCR引物序列由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，反转录试剂盒、SYBR Green PCR 试剂盒，HE染色、油红染色试剂盒均购于上海懿圣生物科技有限公司。

二、方法

(一)动物模型构建 共有10只8周龄雄性SPF级C57BL/6小鼠用于脂肪肝小鼠模型的构建。小鼠体质量为25～30 g，由上海斯莱克实验动物中心提供，饲养于上海交通大学附属第一人民医院实验动物中心。10只小鼠随机分为低脂组(LFD)与高脂组(NFD)，每组5只，LFD组小鼠喂养普通饲料(即低脂饲料)，HFD组小鼠喂养高脂饲料。喂养相应饲料16周后处死小鼠，取部分肝组织经脱水、石蜡包埋或OCT凝胶包埋用于病理学检测。取适当组织行qPCR检测，余组织冻存于液氮中。

(二)肝组织病理检查 建模小鼠处死后，取适当大小的新鲜组织块置于4%甲醛溶液中固定48 h，后常规脱水处理，石蜡包埋。……