长链非编码RNA CCAT1可作为肝细胞癌血浆标志物并预测其治疗效果

2021-05-17张彬彬郁皓曹斐吴晓霞单永锋王昊楠刘慧

肝脏 2021年4期

张彬彬郁皓曹斐吴晓霞单永锋王昊楠刘慧

常用的筛查肝细胞癌(HCC)的手段是AFP检测联合超声多普勒检查，然而，AFP检测早期HCC的敏感度只有39%～65%[1]。目前众多的lncRNA在肿瘤患者血清中被发现高表达，预测其可能作为肿瘤的诊断标志物[2-7]。结肠癌相关转录因子1(colon cancer associated transcript 1，CCAT1)被发现在结直肠癌、胃癌、肝细胞癌、胆囊癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中高表达，并具有促进肿瘤增殖、侵袭和迁移的作用，并与肿瘤的不良预后相关，可作为潜在的预后标志物[4，8-11]。本研究首次检测CCAT1在HCC患者血液中的表达水平，探索其作为诊断HCC的血液标志物的可能性，并研究其在HCC介入或射频前后的表达水平。

材料与方法

一、研究对象

收集江苏省无锡市第五人民医院2017年到2019年期间66例肝癌患者血液标本，并收集50例年龄、性别相匹配的健康成人对照。其中肝癌组的37例患者经介入或射频治疗，并留取治疗后1个月左右的血液标本。静脉采血后2 h内3 000 r/min 4 ℃低温离心15 min，收集血浆，分装到离心管中，每管500 μL冻存在-80 ℃。所有样本采集均得到患者知情同意。所有样本使用取得无锡市第五人民医院伦理委员会同意及支持。

二、RNA提取及实时定量PCR

TRIzol LS Reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 被用来提取血浆总RNA，具体步骤根据产品说明书。RNA被逆转录为cDNA应用HiScript III RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)(Vazyme，南京，中国)。使用Fast Probe Mixture(CWBIO，北京，中国)进行定量PCR反应，2 μL cDNA被用来作为反应模板。反应条件：95 ℃ 10 min预变性，随后95 ℃ 15 s变性，65 ℃ 1 min扩增，共40个循环。β-actin被作为内源性标志物。引物序列如下: CCAT1, 5′-CATTGGGA-AAGGTGCCGAGA-3′ (sense) and 5′-ACGCTTAGCC-ATACAGAGCC-3′ (anti-sense)；β-actin, 5′-TCCTCTC-CCAAGTCCACACA-3′ (sense) and 5′-GCACGAAG-GCTCATCATTCA-3′ (anti-sense)。