郑 硕，黄奕红

(1.福州市二医院肝胆外科，福建 福州 350007；2.福州市二医院超声诊断科，福建 福州 350007)

原发性肝癌(PHC)是全球最常见的恶性肿瘤之一，具有起病隐匿、发展速度快、临床预后差的特点。研究显示，PHC患者自然生存期平均仅为4.3个月，即使手术切除仍具有较高的复发率及致死率，术后5年复发率仍高达70%以上，是导致患者预后不良的重要因素，患者5年生存率仅为37.2%[1]。PHC属于典型多血管肿瘤，发生、进展、复发与血管生成密切相关[2]。血管内皮生长因子(VEGF)是最重要的血管生长因子之一，能通过刺激内皮细胞增殖进而促进肿瘤新生血管生成，也能抑制树突状细胞进而影响机体抗肿瘤免疫功能，在肿瘤细胞生成、迁移及侵袭过程中扮演重要角色[3]。胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)是一种功能复杂的生长调控因子，会引起细胞因子网络的动态平衡破坏，进而促进肿瘤细胞分化、生长，与肿瘤的发生、发展、转移等过程密切相关[4]。目前，临床关于PHC患者肝癌组织中VEGF、IGF-Ⅱ表达情况的变化及其机制少见报道，为此本研究旨在探讨探讨肝癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)的表达水平及影响因素，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料:选择我院收治的82例接受手术治疗的原发性肝癌(PHC)患者作为研究对象，符合以下入组标准：①符合PHC的诊断标准[5]，经病理证实；②术前未接受放化疗及介入治疗；③均实施肝癌切除术治疗；④患者知情同意。82例患者中男48例，女34例；年龄：<60岁35例、≥60岁47例；肿瘤直径：<5 cm 28例、≥5 cm 54例；分化程度：低分化26例、中分化36例、高分化20例；TNM分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期45例、Ⅲ期27例；肝功能Child-Pugh分级：A级47例、B级35例；AFP水平：<400 μg/L 49例、≥400 μg/L 33例；淋巴结转移35例。术后收集82例PHC患者的肝癌组织及癌旁组织(距肝癌组织2～5 cm)，癌旁组织病理证实没有肿瘤细胞浸润，未见增生性病变。本次研究经过本院医学伦理委员会同意。

1.2方法

1.2.1临床资料收集：采用自行设计调查表收集患者一般资料、临床病理特征，包括性别(男、女)、年龄(<60岁、≥60岁)、肿瘤直径(<5 cm、≥5 cm)、肿瘤包膜(有、无)、分化程度(低分化、中分化、高分化)、TNM分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期)、肝功能分级(A级、B级)、淋巴结转移(是、否)、甲胎蛋白(AFP)水平(<400 μg/L、≥400 μg/L)。

1.2.2VEGF、IGF-Ⅱ检测：收集肝癌组织及癌旁组织(距肝癌组织2-5cm)，使用石蜡包埋，连续切片，采用免疫组织化学法检测VEGF、IGF-Ⅱ表达情况，经免疫组化染色后使用Nikon YS100光学显微镜观察染色情况，每张切片选取5个高倍视野进行观察，参考文献标准[6]根据阳性细胞比例评分×着色强度评分将表达结果分为阴性(-)、弱阳性(+)、中度阳性(++)、强阳性(+++)。

1.3观察指标：①比较肝癌组织和癌旁组织VEGF、IGF-Ⅱ表达阳性率差异,总阳性率为弱阳性(+)率、中度阳性(++)率、强阳性(+++)率之和；②分析一般资料、临床病理特征与VEGF、IGF-Ⅱ表达阳性率的相关性。

1.4统计学分析：采用SPSS20.0统计软件进行分析，计数资料以率(%)表示，组间进行χ2分析，采用单因素χ2分析及多因素Logistic回归分析VEGF、IGF-Ⅱ表达影响因素，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1肝癌组织及癌旁组织VEGF、IGF-Ⅱ表达比较：癌组织中VEGF表达阳性率为65.85%(54/82)、IGF-Ⅱ表达阳性率为68.29%(56/82)，均明显高于癌旁组织28.05%(23/82)、26.83%(22/82)，差异具有统计学意义(χ2=23.526、28.262，均P<0.01)，见表1～2。

表1 肝癌组织及癌旁组织VEGF表达比较[例(%)]

表2 肝癌组织及癌旁组织IGF-Ⅱ表达比较[例(%)]

2.2VEGF、IGF-Ⅱ表达影响因素分析:单因素分析显示，不同肿瘤直径、分化程度、TNM分期、肝功能分级、淋巴结转移、AFP水平患者癌组织VEGF、IGF-Ⅱ表达阳性率差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素分析显示，肿瘤直径(OR=1.645,95%CI=1.102～3.783)、分化程度(OR=1.943,95%CI=1.203～4.004)、TNM分期(OR=2.018,95%CI=1.287～4.742)、肝功能分级(OR=1.865,95%CI=1.134～3.953)、淋巴结转移(OR=2.121,95%CI=1.303～4.944)、AFP水平(OR=1.809,95%CI=1.129～3.887)是影响癌组织VEGF表达的独立危险因素(P<0.05)； 肿瘤直径(OR=1.672,95%CI=1.112～3.896)、分化程度(OR=1.958,95%CI=1.212～4.116)、TNM分期(OR=2.042,95%CI=1.272～4.778)、肝功能分级(OR=1.927,95%CI=1.156～3.971)、淋巴结转移(OR=2.166,95%CI=1.324～4.967)、AFP水平(OR=1.659,95%CI=1.130～3.967)是影响癌组织IGF-Ⅱ表达的独立危险因素，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3～5。

表3 VEGF、IGF-Ⅱ表达影响因素的单因素分析[例(%)]

表4 VEGF表达影响因素的多因素分析

表5 IGF-Ⅱ表达影响因素的多因素分析

3 讨论

PHC早期症状不明显，病情进展迅速，确诊时多为局部晚期及晚期，部分发生淋巴结转移或远处转移，部分患者丧失手术切除的机会。因而，PHC早期诊治具有重要意义。目前，PHC诊断仍以检测甲胎蛋白(AFP)为主，但具有较高的漏诊率，其中40%的早期肝癌和15%～20%的晚期肝癌患者AFP检测结果为阴性。寻找具有更高灵敏度和特异度的肿瘤标记物来弥补AFP不足，以提高早期肝癌的诊断率，实现PHC早期发现、早期诊断、早期治疗，成为临床研究的重要课题。

VEGF是多功能的血管生长因子，能够与血管内皮细胞膜络氨酸激酶受体结合，进而促进细胞分化、增殖，促进肿瘤新生血管形成，是血管增生的强烈刺激因子，与肺癌、肠癌、肝癌等多种肿瘤发生、进展密切相关[7]。研究显示，肿瘤患者癌组织中的VEGF表达明显增加，表明VEGF在肿瘤发病过程发挥重要作用。VEGF表达增加能够血管生成，从而为肿瘤细胞提供充足的血液供应，保证肿瘤细胞生长及增殖所需的营养，促进了肿瘤细胞生长，另外VEGF表达增加能够使血管内皮细胞基质发生降解，削弱血管屏障作用，导致癌细胞血管渗透，致使癌细胞通过血流扩散，引起肿瘤转移。本研究结果显示，癌组织中VEGF表达阳性率为65.85%(54/82)，明显高于癌旁组织28.05%(23/82)，与文献研究[8]相符，提示PHC患者癌组织中VEGF呈高表达，与PHC发病密切相关。

IGF-Ⅱ大部分由肝脏合成，是细胞增殖的重要调控因子，具有多重的生物效应。IGF-Ⅱ过度表达会破坏细胞因子网络的动态平衡，放大肿瘤细胞持续生长信号的传递，刺激癌前期的肝细胞增殖失控而发生肿瘤，同时也在一定条件下加速高增殖活性状态的癌前肝细胞恶性转化，最终导致肝癌发生[9-10]。研究显示，IGF-Ⅱ与肝癌的发生、发展密切相关，可作为肝癌诊断及评判治疗效果的新肿瘤标记物，能够使AFP阴性的PHC患者获得进一步明确诊断。本研究结果显示，癌组织中IGF-Ⅱ表达阳性率为68.29%(56/82)，明显高于癌旁组织26.83%(22/82)，提示PHC患者癌组织中IGF-Ⅱ呈高表达，与PHC发病密切相关，与文献研究[11]相符。

本研究结果显示，肿瘤直径≥5 cm、低分化程度、高TNM分期、肝功能Child-Pugh分级差、淋巴结转移、AFP≥400 ug/L是导致癌组织VEGF、IGF-Ⅱ达增加的独立危险因素，表明癌组织VEGF、IGF-Ⅱ表达与肝癌生物学行为有关。VEGF、IGF-Ⅱ高表达则会诱导血管生成，能够维持肿瘤的持续生长，促使肿瘤直径持续增大。低分化程度患者则肿瘤恶性程度越高，肿瘤的新生血管数量越多，VEGF、IGF-Ⅱ表达增加越显著，临床预后也越差。高TNM分期及高肝功能Child-Pugh分级患者肝功能受损更加严重，提示肿瘤侵袭性更强，肝癌细胞生长速度更快，局部缺氧、缺血状况更明显，进而刺激癌细胞分泌大量的VEGF、IGF-Ⅱ，使癌组织VEGF、IGF-Ⅱ表达增加。VEGF、IGF-Ⅱ高表达可促进淋巴管生成，癌细胞进入淋巴管后向管腔内聚集，侵袭淋巴结致淋巴结受累。AFP水平与肝癌的恶性程度呈正相关，AFP水平越高，则肝癌的恶性程度越高，则VEGF、IGF-Ⅱ表达增加越显著。

综上所述，PHC患者肝癌癌组织中VEGF、IGF-Ⅱ表达明显增加，其表达水平与肿瘤直径、淋巴结转移、病理分化程度、TNM分期、肝功能分级、血清AFP水平存在相关性。