龚 亚，李 敏，樊 莉，曹 健

盐酸达克罗宁为起效迅速、作用久、不良反应小、安全系数高的局部麻醉药[1-3]，临床主要用于黏膜的表面麻醉、皮肤镇痛和止痒等。现行版军队制剂和医院制剂规范均收载了盐酸达克罗宁乳膏[4-5]，有研究表明，盐酸达克罗宁乳膏在配制过程中盐酸达克罗宁与辅料存在络合情况[6-7]，但未有研究报道其在常用溶剂中的稳定性。通过检索近20年相关文献，涉及盐酸达克罗宁含量测定的39篇文献中，常用5种溶剂制备试验溶液，以甲醇、乙腈、乙醇、水、磷酸盐缓冲液为溶剂的文献数量分别为10、1、6、11和11篇。预实验中发现盐酸达克罗宁在甲醇中稳定性差，文献中仍存在以甲醇为溶剂的情况，且缺乏相关的系统性探究。本实验选取甲醇、乙腈、无水乙醇、水、不同pH值的0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液、盐酸达克罗宁乳膏测定中的流动相为反应体系，测定盐酸达克罗宁的含量变化情况，考察其在这6类常用溶剂中的稳定性，为质量标准研究提供参考[8-9]。盐酸达克罗宁化学结构式，见图1。

图1 盐酸达克罗宁化学结构式

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 安捷伦1260型HPLC仪（检测器为G7114A VWD，操作工作站为Chemstation，美国安捷伦）；PHS-3C型精密pH计（上海雷磁）；精密电子天平（EX225DZH OHAUS美国，ME235S Sartorius德国）。

对照品盐酸达克罗宁（批号：100423-201102，供HPLC法测定，按C18H27NO2·HCl计，含量99.8%）购自中检院。原料药盐酸达克罗宁（批号16110501）购自扬子江药业。甲醇、乙腈均为色谱级，购自霍尼韦尔；磷酸二氢钾、无水乙醇、磷酸均为分析纯，购自重庆川东化工；水为纯化水。

1.2 HPLC测定方法[4]采用菲罗门luna色谱柱（填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，序列号为00G-4252-E0，250 mm×4.6 mm，5μm），测定波长选择282 nm，以0.02 mol/L KH2PO4溶液（H3PO4调pH至3.0）为A相、乙腈为B相，以A∶B=55∶45(V/V)分析测定，流速设定为1.0 ml/min，取10μl进样。

1.3 实验溶液的制备 分别以流动相、甲醇、乙腈、无水乙醇、不同pH值的0.02 mol/L KH2PO4溶液（pH1.0～6.0）、纯化水这6类溶剂制备盐酸达克罗宁试验溶液，使各溶液每1 ml中约含0.2 mg的盐酸达克罗宁。各实验用的储存溶液均密塞，以封口膜封口后立即冷藏（2～10℃）保存，每次分析前均需放至室温。

1.4 系统适用性考察试验 取“1.3实验溶液的制备” 项下流动相溶解的盐酸达克罗宁溶液，按“1.2 HPLC测定方法”项，取10μl进样，记录盐酸达克罗宁图谱。

1.5 不同溶剂中盐酸达克罗宁稳定性考察 以“1.3实验溶液的制备”项下方法制备6类常用溶剂的盐酸达克罗宁原料药溶液，按“1.2 HPLC测定方法”项分别于0、2、4、6、8、10、12 h时连续进样，分别计算平均峰面积，考察盐酸达克罗宁峰面积变化情况。要求与零点比较，峰面积变化不＞2%（峰面积百分比=测试点峰面积/零点峰面积×100%），否则说明在该溶剂中不稳定。

1.6 盐酸达克罗宁对照品在流动相中的长期稳定性考察[8-12]取“1.3实验溶液的制备”项下流动相溶解的盐酸达克罗宁对照品溶液，按“1.2 HPLC测定方法”项在保存的0、1、4、7、10、14、21、28、35 d时进样，同时记录当天新鲜配制的对照品溶液峰面积值，以当天新鲜配制的对照品溶液计算对照品储存溶液的标示量。基于下述公式进行计算：

式中，AN和CN表示测定当天新鲜配制对照品溶液的峰面积和浓度；AT和CT表示测定当天对照品储存溶液的峰面积和浓度。要求对照品溶液外观性状无异常现象，且与新鲜配制的一致；色谱图中均未出现杂质峰；每个分析测试点，对照品储存溶液的标示量与0 d的差异≤2.0%。

2 结果

2.1 系统适用性考察试验结果 盐酸达克罗宁图谱见图2，盐酸达克罗宁出峰不存在干扰，理论塔板数符合要求，阴性样品溶液无相同色谱峰，连续进样5次，R SD≤2%，符合要求。

图2 系统适用性HPLC图

2.2 不同溶剂中盐酸达克罗宁稳定性考察结果室温下，盐酸达克罗宁在不同溶剂中的含量随时间变化情况见图3，由图可以看出盐酸达克罗宁在甲醇中8 h、无水乙醇中6 h，其降解＞2%，不稳定；在流动相、乙腈、纯化水、不同pH值的0.02 mol/L K2PO4溶液（pH1.0～6.0）这4类溶剂中12 h的变化量≤2%，均稳定。考察结果表明，在方法学建立时，建议以酸性的流动相进行样品制备，从而保证盐酸达克罗宁的稳定性。

图3 盐酸达克罗宁在不同溶剂中的稳定性

2.3 盐酸达克罗宁对照品在流动相中的长期稳定性考察结果 盐酸达克罗宁对照品溶液在冷藏（2～10℃）条件下密封储存35 d，对照品储存溶液外观与新鲜配制的一致，未出现浑浊、沉淀等异常现象；色谱中均未出现杂质峰，每个分析测试点，对照品溶液的含量变化见图4。结合含量标准要求，在冷藏（2～10℃）条件下，盐酸达克罗宁对照品储存溶液效期可定义为35 d。

图4 盐酸达克罗宁对照品溶液稳定性

3 讨论

不同溶剂中盐酸达克罗宁稳定性考察项下，以甲醇、乙腈、无水乙醇为溶剂时，原有流动相比例（水相∶有机相=55∶45）不能完成测定，出现杂质峰干扰主成分的测定。《中国药典》2020年版四部[13]规定，流动相的各组分比例、色谱柱（除填充剂种类不可改变外）允许改变，以满足测定要求。调整流动相比例时，最小比例的组分X可在70%～130%或X±2%内调整（两者之间选择最大值）。根据前述要求，甲醇、乙腈和无水乙醇为溶剂的情况下，分别以流动相比例（水相∶有机相）60∶40、60∶40、65∶35可完成测定，测得盐酸达克罗宁含量的变化情况，其中以无水乙醇为溶剂时，盐酸达克罗宁12 h降解量＞4%，测定时采用安捷伦EC色谱柱（填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，699975-902，50 mm×4.6 mm，2.7μm）可排除干扰。

实验中以纯化水为溶剂的情况下，盐酸达克罗宁溶解性差，需超声溶解。在测定过程中，偶有基线不平的干扰，导致主峰峰型差，无法正常积分。通过探究发现，以水为溶剂时，在保留时间58 min左右出现扁平的杂峰，推测该峰是干扰的主要原因。因此在实验过程中保证60 min以上的洗脱时间，即可避免干扰。

通过实验发现，盐酸达克罗宁在甲醇、无水乙醇中不稳定，在乙腈、纯化水、不同pH值的0.02 mol/L KH2PO4溶液（pH 1.0～6.0）、0.02 mol/L KH2PO4溶液（H3PO4调pH至3.0）-乙腈（V/V，55∶45）中稳定，建议以酸性的流动相进行样品制备，从而保证盐酸达克罗宁的稳定性。