李学峰 周世豪 王新花 庞益伟 王雁林 李清春 刁兴华 刘海燕

1 滨州医学院附属医院生殖医学科 山东 滨州 256603；2 滨州医学院附属医院消化内科 山东 滨州 256603

一氧化氮(nitric oxide,NO)是内皮细胞分泌的一种介导血管舒张的主要神经递质，与阴茎勃起功能障碍密切相关[1]。一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)是调节NO浓度的关键酶。非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)是NOS的内源性抑制物，因而ADMA是体内NO合成的抑制性调节物，90%以上的内源性ADMA由二甲基精氨酸-二甲胺水解酶(dimethylarginine-dimethylamine hydrolase，DDAH)水解代谢，因而体内NO的浓度与DDAH的活性含量有关。DDAH有DDAH1和DDAH2两种亚型，DDAH1主要分布在肾小管、肝脏，而DDAH2主要分布在血管内皮细胞，与内皮型NOS表达的组织一致[2-4]。利用干细胞治疗可以明显改善勃起功能障碍动物的勃起功能，脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)取材于睾丸附睾周围的脂肪组织，操作简单，技术成熟，分离成功率高，并发症少，是理想的载体[5-6]。本研究应用基因工程技术将DDAH2基因导入干细胞基因组中，使DDAH2在ADSCs持续表达，降低ADMA生成，提高NO生成，改善修复血管内皮细胞，从而期望在以后的临床应用上达到改善勃起功能的目的。

1 材料与方法

1.1 实验动物与试剂 雄性SD大鼠，体质量为(100±30)g，购自上海斯莱克实验动物有限公司，许可证号为SCXK(沪)2017-0005。Ad-DDAH2-GFP(上海吉凯生物有限公司)，低糖DMEM培养基(Hyclone公司)，胎牛血清、胰酶(Gibco公司)，DDAH2抗体(H-85)(santa cruz biotechnology公司，No. sc-32859)，β-Actin抗体(Epitmics公司)，PCR试剂盒(TaKaRa公司)。培养板及培养瓶(Corning公司)。

1.2 方法

1.2.1 SD大鼠ADSCs的分离培养 3月龄雄性SD大鼠，颈椎脱臼法处死，75%酒精浸泡30 min，超净工作台内将大鼠固定。取双侧腹股沟区切口，充分分离切取皮下脂肪组织，将脂肪组织剪成尽可能小的组织小块，加入2倍体积0.1%Ⅰ型胶原酶，37℃震荡消化30～45 min；……