王 磊，杨承槐，刘 莹

(中国兽医药品监察所，北京 100081)

MDBK细胞(Madin-Darby Bovine Kidney Cells，MDBK)是由S H Madin和N B Darby于1953年从美国一头健康的成年公牛肾脏组织中分离培养建立的贴壁培养型传代细胞系[1]。该细胞系对多种病原(牛病毒性腹泻病毒、传染性牛鼻气管炎病毒、伪狂犬病毒等)易感[2-3]，被广泛用于病毒感染、检测和培养领域，尤其用于传染性牛鼻气管炎病毒的增殖，病毒感染效率高、增殖快且不易变异，是公认的适合生产传染性牛鼻气管炎疫苗的细胞基质[4]。但是，以MDBK细胞作为生产基质的相关疫苗，由于其贴壁生长特性的限制，多采用转瓶培养方式和微载体培养方式进行生产，生产周期长，下游工艺相对复杂，工业化大规模生产的难度较大。因此驯化全悬浮的MDBK细胞具有十分重要的现实意义。

悬浮细胞是指生长不依赖支持物表面,可在液体培养基中呈悬浮状态生长的细胞。与贴壁细胞相比，悬浮细胞尽量减少或避免了动物源性血清的添加，使其具有更好的传代稳定性和安全性[5]，同时还具备了可线性放大培养的优势，是实现生物反应器大规模、高效率生产的前提条件[6-7]。悬浮培养基的使用还彻底摆脱了细胞贴附基质，可以有效地简化下游分离纯化工艺的难度，节约设备空间，缩短生产时间，降低生产成本[8]。本试验对一株贴壁的MDBK细胞进行了全悬浮驯化研究，以期为相关产品生产工艺的升级改进提供细胞学基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞和毒株 MDBK细胞(第9代，批号20170623)、伪狂犬病毒(Bartha-K61株)、传染性牛鼻气管炎病毒(AV21株)由国家兽医微生物菌种中心鉴定保藏。……