卢楠娟，白 冰，何 箫，张黎明

心血管病是全球发病率和病死率的主要原因，动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是大多数心血管病发病的基础[1-4]。 泡沫细胞形成在AS 发生、发展的各环节都发挥着重要的作用，然而目前尚没有效逆转AS 的方法[5]。 Allahverdian 等[6]报道发现平滑肌细胞在人类冠状动脉粥样硬化斑块中比之前已知的要多， 人类AS 斑块中许多被鉴定为单核细胞源性的泡沫细胞实际来源于平滑肌细胞。 血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMC） 是构成人类AS 斑块中的主要类型细胞[7-8],需进一步研究平滑肌源性泡沫细胞生物发生的特异性机制，以探索其在AS 中的作用。

Genistein 是异黄酮类化合物，主要在豆类植物中，可调整血脂、抗氧化、抑制血管炎症等反应，也是天然的酪氨酸激酶 （protein tyrosine kinase，PTK）抑制剂，从而具有直接或间接抗AS 作用[9-11]。 因此，本研究探讨Genistein 对平滑肌源性泡沫化的影响,为抗AS 治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 8~12 周龄健康雄性维斯塔尔（Wistar）大鼠，来自哈尔滨医科大学第二附属医院实验动物中心提供，Dulbecco 改良的Eagle 培养基（dulbecco's modified eagle medium，DMEM）高糖型；胎牛血清购自ExCellBio 公司； 氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL)购自广东奕源生物公司；平滑肌肌动蛋（α-smooth muscle actin，SMA） 抗体购自 Abcam 公司；FITC 标记的山羊抗兔抗体购自美国AffinitY 公司；木瓜蛋白酶、二硫代苏糖醇 （DL-Dithiothreitol，DTT）、 氯 化 钙 （Calcium chloride，CaCl2）、4- 轻乙基呱嗦乙磺酸（2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid，HEPES）、油红 O 染料、 葡萄糖（glucose,Glu）、Genistein、Daidzein、Tyrphostin等试剂购自Sigma 公司。

1.2 仪器和设备 体式显微镜购自日本Nikon SMZ645； 荧光显微镜、 倒置相差显微镜购自日本Olympus 公司；细胞培养箱美国Thermo 公司。

1.3 实验方法

1.3.1 肠系膜动脉平滑肌细胞（mesenteric artery smooth muscle cells，MASMC）原代分离、培养 Wistar大鼠颈椎脱臼;放血；……