王峰 刘国强 潘浩 季文辉△

骨肉瘤(OS)是一种起源于间充质细胞的恶性肿瘤[1]。近些年患者的发病率明显降低，然而病人会出现不同程度的远处转移和复发，因此深入探讨骨肉瘤的发病机制至关重要。微小RNA是一类非编码RNA，可以诱导信使RNA的降解和翻译、抑制、调节促癌基因或者抑癌基因的表达，研究表明miRNA-363具有抑制骨肉瘤的作用[2]，有文献报道HNF1A-AS1可以通过激活Wnt/β-catenin通路促进骨肉瘤的增殖和转移[3]，HNF1A-AS1可以通过靶向调控miRNA实现其促癌作用[4]。黄连素为一种异喹啉类生物碱，能够调节炎性反应和淋巴免疫等，具有抗肿瘤作用，如黄连素可以在体外抑制肝癌的增殖和转移[5]。然而有关黄连素与骨肉瘤之间的关系尚不明了，因此本研究主要分析黄连素通过LncRNA HNF1A-AS1调控miRNA-363对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。

1 材料与方法

1.1 细胞培养、分组和干预方法

将培养在DMEM中(37 ℃，5% CO2)的处于生长期的U2OS细胞分为对照组、黄连素组、黄连素+HNF1A-AS1组和HNF1A-AS1组。黄连素+HNF1A-AS1组和HNF1A-AS1组转染HNF1A-AS1 pcDNA 3.1质粒，根据制造商的说明转染细胞，以感染复数(MOI)为10的比例加入细胞和质粒载体，在24 h后收集细胞用于后续实验。根据文献[5]，黄连素组、黄连素+HNF1A-AS1组在培养基中加入终浓度为100 μmol/L的黄连素，培养48 h。

1.2 主要材料和仪器

人OS细胞系U2OS(ATCC公司，美国)；DMEM培养基(Invitrogen公司，美国)；HNF1A-AS1过表达质粒以及相应的阴性对照(Negative Control，NC)(Thermo Fisher公司，美国)；Lipofectamine 2000(Invitrogen公司，美国)；PCR引物由Genewiz公司(中国)设计和合成；Trizol试剂(Invitrogen公司，美国)；逆转录cDNA试剂盒和SYBR Green PCR Master Mix qPCR试剂盒(Roche公司，瑞士)；MiScript试剂盒和MiScript SYBR-Green PCR试剂盒(QIAGEN公司，德国)；细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8，CCK-8)试剂盒和结晶紫染色试剂盒(Beyotime生物技术研究所，中国)；……