赵 伟， 孙兆亮， 王 萍， 牟晓莉

德州市人民医院 生殖医学科，山东 德州 253000

复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)是妊娠期并发症之一，发病率约5%，一般指与同一性伴侣连续发生3次或3次以上妊娠24周前丢失胎儿[1]，而我国通常将3次或3次以上在妊娠28周前的胎儿丢失称为RSA[2]。RSA的发生涉及多种因素，包括遗传、解剖学异常、血栓前状态、感染、免疫、内分泌、环境、流行病学及男性因素等[3]，但仍有约50%的RSA患者病因不明。孕激素在怀孕期间具有重要的免疫调节作用，通过与孕激素受体(progesterone receptor，PR)相互作用调节母亲的免疫反应，防止胎儿排斥。PR在子宫内膜细胞核和细胞膜上均有分布，分别被称为核孕激素受体(nuclear progesterone receptor，NPR)和膜孕激素受体(membrane progesterone receptor，mPR)，mPR有mPR-α、mPR-β两个亚型[4]。本研究旨在探讨mPR亚型mPR-α、mPR-β及NPR在RSA中的表达及临床意义。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 将德州市人民医院自2018年1月至2020年8月收治的92例RSA患者纳入RSA组，将同期体检的94例正常育龄女性纳入正常组。RSA组纳入标准：符合RSA诊断标准，即与同一性伴侣连续发生3次或3次以上妊娠28周前丢失胎儿。正常组纳入标准：至少有过1次正常妊娠且无自然流产病史的育龄妇女。排除标准：年龄>40岁；入组前3个月内服用过激素类药物；影像学检查提示解剖学异常或畸形、生殖道感染、多囊卵巢综合征、子宫内膜异位等；合并糖尿病、甲状腺疾病、恶性肿瘤、血液系统或免疫系统疾病等；患心理疾病或精神障碍；父母双方染色体异常。正常组平均年龄(32.40±3.32)岁，平均体质量(26.30±2.05)kg/m2，平均孕次(3.31±0.29)次；RSA组平均年龄(31.90±2.47)岁，平均体质量(25.80±1.83)kg/m2，平均孕次(3.45±0.36)次。两组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。研究对象及其家属均签署知情同意书。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 标本处理 月经周期第10～14天用直径0.3 cm宫腔组织吸引管(上海家宝医学保健科技有限公司)吸取少许子宫内膜组织，新鲜组织标本迅速放入液氮保存并备用。

1.2.2 主要仪器及试剂 主要仪器包括SMA1000微量紫外分光光度计、Bio-Rad S1000梯度聚合酶链反应仪、罗氏480实时荧光定量聚合酶链反应仪，主要试剂包括RNA提取试剂盒和cDNA合成试剂盒。

1.2.3 实时荧光定量聚合酶链反应检测 将标本经液氮取出，严格按照上述试剂盒说明书提取总RNA，经紫外分光光度计测定纯度及含量，鉴定后逆转录为cDNA，进行实时荧光定量聚合酶链反应扩增。聚合酶链反应引物序列见表1。聚合酶链反应条件：95℃ 15 s，95℃ 15 s，60℃ 30 s，72℃ 20 s，共45个循环，72℃延伸5 min。测定目的基因mRNA表达量，以2-△△Ct方法计算相对表达量。

表1 聚合酶链反应引物序列

2 结果

2.1 两组研究对象子宫内膜mPR-β mRNA表达水平比较 RSA组子宫内膜mPR-β mRNA相对表达量为(0.472±0.023)，低于正常组的(1.240±0.014)，差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

图1 两组研究对象子宫内膜mPR-β mRNA表达水平比较

2.2 两组研究对象子宫内膜mPR-α mRNA表达水平比较 正常组子宫内膜mPR-α mRNA相对表达量为(2.249±0.048)，RSA组为(2.376±0.080)，差异无统计学意义(P>0.05)。见图2。

图2 两组研究对象子宫内膜mPR-α mRNA表达水平比较

2.3 两组研究对象子宫内膜NPR mRNA表达水平比较 正常组子宫内膜NPR mRNA相对表达量为(1.076±0.021)，RSA组为(1.110±0.017)，差异无统计学意义(P>0.05)。见图3。

图3 两组研究对象子宫内膜NPR mRNA表达水平比较

3 讨论

妊娠是一个复杂的生理过程，约50%的RSA病因不明[5]。探索RSA病因对于疾病的预防和治疗具有重要的临床意义。

孕激素是生殖过程中必不可少的激素，其主要作用包括调节免疫、抑制炎症反应、减少子宫收缩、改善子宫胎盘循环等[6]。孕激素缺乏可能导致子宫内膜发育障碍，诱发RSA。孕激素水平明显低下提示妊娠结局不良[7]。但RSA患者是否需要补充孕激素目前仍存在争议。David等[8]研究表明，与安慰剂/正常组比较，应用孕激素补充剂的女性流产次数减少，对于不明原因反复流产的女性，补充孕激素可能降低妊娠流产率。但Coomarasamy等[9]的研究结果却表明，RSA患者补充孕激素不能改善妊娠结局。PR是配体激活的甾体受体超家族成员，由羧基端配体结合结构域、中心DNA结合结构域、氨基末端结构域组成，包括NPR和mPR。NPR主要起快速信号转导的作用。mPR-α和mPR-β是利用两个启动子由同一基因产生的不同亚型：mPR-β是全长受体；mPR-α是N端截断型受体，缺失了mPR-β中的前164个氨基酸。因此，在结构上，mPR-β在氨基末端结构域中比mPR-α多了第3个激活域。两者结构上不同，调节不同的靶基因亚群，介导不同的组织特异性功能[10]。mPR-α和mPR-β是癌症和生殖相关疾病中很好的药理靶点和疾病标志物[11]。本研究结果显示：RSA组子宫内膜mPR-β mRNA相对表达量低于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)；正常组和RSA组子宫内膜mPR-α mRNA、NPR mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。这提示，mPR-β在妊娠期间的表达变化可能是最终引起RSA的一个原因。

综上所述，RSA患者子宫内膜mPR-β mRNA相对表达量低于正常育龄妇，mPR-β表达降低可能是导致RSA发生的一个原因。