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Ras效应因子-1在上皮性卵巢肿瘤中表达水平及意义

2021-05-10

临床军医杂志 2021年4期
关键词:原癌基因结构域上皮

郑 乐

中国医科大学肿瘤医院(辽宁省肿瘤医院) 妇科,辽宁 沈阳 110042

卵巢恶性肿瘤在女性生殖器官恶性肿瘤中死亡率居第1位,病因尚未明确。恶性肿瘤的发生和发展通常是一个多因素、多阶段的过程,包括原癌基因激活、肿瘤抑制基因失活等。有研究表明,Ras基因为原癌基因,其激活突变参与多种肿瘤的发生和发展过程,如膀胱尿路上皮癌[1]、胃癌[2]、肺癌[3]、肝癌[4]等。Ras效应因子-1(Ras interactor-1,RIN1)是人体内的一个特征性Ras效应因子[5],能够直接激活ABL络氨酸激酶及RAB5家族的GTP酶[6],还可参与表皮生长因子受体的内吞作用[7]。本研究旨在探讨RIN1在上皮性卵巢肿瘤中的表达水平及意义。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集辽宁省肿瘤医院自2017年1月至2018年12月收治的150例接受手术治疗患者的新鲜卵巢组织标本。150例患者中,正常卵巢30例(A组),上皮性卵巢良性肿瘤30例(B组),上皮性卵巢交界性肿瘤30例(C组),上皮性卵巢恶性肿瘤60例(D组)。D组中,病理分期Ⅰ+Ⅱ期30例,Ⅲ+Ⅳ期30例;分化程度高-中分化30例,低分化30例。患者及其家属均签署知情同意书。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 仪器及试剂 RIN1、β-actin兔抗人多克隆抗体,RIN1、β-actin引物,实时定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)试剂盒,PVDF膜(北京博奥森公司);SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(南京凯基生公司);电泳仪,实时定量PCR仪等。

1.3 Western Blot法检测RIN1蛋白表达水平 组织块称质量,提取组织中核蛋白并测定其含量,电泳,转膜,封闭,加一抗,孵育PVDF膜,4℃过夜,加二抗,室温振荡孵育,Western Blot试剂盒显色,凝胶成像系统分析条带灰度值并进行比较。

1.4 PCR法检测RIN1 mRNA表达水平 提取标本总RNA,采用Takata等方法进行PCR检测。RIN1上游引物为5′-GGCAGCAGAGGAGTAGCTTGA-3′,RIN1下游引物为5-GCTTGCTGGCGCTAAAAGG-3′,β-actin上游引物为5-TTAGTTGCGTTACACCCTTTC-3′,β-actin下游引物为5-ACCTTCACCGTTCCAGTTT-3′。采用2-△△Ct法分析结果,实验重复3次。

2 结果

2.1 RIN1蛋白表达水平比较 A组、B组、C组、D组RIN1蛋白相对表达量分别为(0.096 2±0.026 2)、(0.371 0±0.028 3)、(0.564 3±0.056 7)、(0.732 0±0.098 2),两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。见图1。D组中,Ⅲ+Ⅳ期RIN1蛋白相对表达量高于Ⅰ+Ⅱ期[(0.813 0±0.061 5)比(0.651 0±0.047 6)],低分化RIN1蛋白相对表达量高于高-中分化[(0.785 0±0.087 9)比(0.679 0±0.078 0)],差异均有统计学意义(P<0.05)。

图1 Western Blot法检测RIN1蛋白表达水平

2.2 RIN1 mRNA表达水平比较 A组、B组、C组、D组RIN1 mRNA相对表达量分别为(3.890 0±0.440 5)、(5.517 0±0.281 7)、(7.593 0±0.636 8)、(9.722 0±1.177 0),两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。D组中,Ⅲ+Ⅳ期RIN1 mRNA相对表达量高于Ⅰ+Ⅱ期[(10.710 0±5.248 0)比(8.733 0±0.723 7)],低分化RIN1 mRNA相对表达量高于高-中分化[(10.450 0±0.895 9)比(8.99 0 0±0.953 9)],差异均有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

恶性肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等与原癌基因、抑癌基因的突变、失调有关。RIN1作为Ras的效应因子,在细胞中广泛存在。RIN1定位于11q13.2,主要功能结构域包括ABL结合结构域、Ras结合结构域、与空泡蛋白分选蛋白相关的鸟苷酸交换因子等[8-9]。其主要功能如下:通过与H-Ras竞争性结合,干扰其信号传导,抑制H-Ras介导的细胞转化[5];具有Rab5a GTPase的GEF活性,通过与Rab5直接结合,泛素化Ras,介导表皮生长因子受体内陷降解,促进细胞内吞[10]。Inoue等[11]研究报道,RIN1可能通过Ras-Erk信号通路影响结肠癌的发生和发展。Wang等[3]研究表明,在非小细胞肺腺癌组织中,RIN1的表达水平与组织分化程度、肿瘤临床病理分期、淋巴结转移情况相关,高表达组患者预后更差。

本研究结果显示:上皮性卵巢恶性肿瘤的RIN1蛋白相对表达量、RIN1 mRNA相对表达量均明显高于正常卵巢组织、上皮性卵巢良性肿瘤、上皮性卵巢交界性肿瘤,且上皮性卵巢恶性肿瘤Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期,低分化高于高-中分化。这提示:RIN1可促进上皮性卵巢肿瘤细胞增殖,并抑制凋亡;RIN1表达水平与肿瘤的临床病理分期、分化程度相关。

综上所述,随着上皮性卵巢肿瘤恶性程度上升,RIN1表达明显增强,RIN1在上皮性卵巢恶性肿瘤的发生和发展过程中具有重要的促进作用。RIN1可成为判断肿瘤发生、发展及预后的重要指标,后续深入研究RIN1促进上皮性卵巢恶性肿瘤发生和发展的分子生物学机制,有望为卵巢癌提供新的治疗靶点。

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