陈洁，江源，冯静，周乙华，胡娅莉，戴毅敏

南京大学医学院附属鼓楼医院，南京210008

巨细胞病毒（CMV）宫内感染是引起胎儿畸形的重要病原体［1］，CMV 宫内感染对胎儿的影响程度与母体孕期CMV感染类型有关［2-3］，CMV IgG亲合力指数（AI）检测是目前公认能够有效区分CMV 感染类型的方法［4］。CMV 有超过200 个开放阅读框，编码的多种蛋白可设计作为重组抗原检测特异性IgG抗体。既往研究报道显示，CMV 的被膜磷蛋白150（pp150）、pp28、包膜糖蛋白gB（gB）及非结构蛋白pp52 等能被大部分CMV IgG 阳性血清识别，因而可能替代全病毒抗原用于检测CMV IgG 抗体［5-6］。本研究中，我们选取与进口试剂盒检测IgG 一致性较好的重组多肽进一步用于检测CMV IgG AI，即在重组多肽ELISA 基础上引入尿素变性处理［7］，使低亲合力抗体与抗原的结合明显减少，而几乎不影响高亲合力抗体与抗原的结合，从而判断重组多肽是否同时适合用于CMV IgG AI 检测以正确区分患者CMV感染类型。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2006-2009年采集并保存南京大学医学院附属鼓楼医院41例新生儿出生后1、3.5、8个月和2岁时的外周血，以进口试剂检测血清CMV IgG，随访至2岁，9例未见感染CMV，32例在2岁前首次感染CMV。2011年6月—9月随机采集南京市0～8岁儿童200 例血清，其中CMV IgG 阴性74 例、CMV IgG 阳性126例，用于初步评估重组多肽的抗原性。另外，从上述随访期间明确首次感染的32例婴幼儿中随机挑选8例原发感染血清以及7例确定为潜在感染血清，以初步判断重组多肽是否同时适合IgG AI检测。

1.2 重组多肽抗原的制备 根据文献报道选取在人群中高度保守且编码蛋白能被大部分CMV IgG阳性血清识别的基因片段及相应的引物序列，以CMV感染患者的外周血白细胞DNA 为模板，采用巢式PCR 扩增目的基因片段。……