张晶，毕利泉，曹瑞雪，姜贝贝，张自成，刘晓红

1 山东省立第三医院，济南250031；2 中国人民解放军联勤保障部队第960医院；3 深圳市中医院 广州中医药大学第四临床医学院

肝细胞肝癌（HCC）是我国第4 位常见的恶性肿瘤，其主要发病危险因素是乙型肝炎病毒（HBV）感染［1］。大量研究显示，乙型肝炎病毒X（HBx）基因编码的HBx 蛋白可以促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭，从而加速肝癌的发展［2］。既往我们检测HCC 患者的肝癌组织及非癌性肝组织，发现HBx 蛋白羧基端的缺失突变是HBV相关HCC中的频发事件，并发现了一个HBx基因的天然缺失突变体HBx-128w，导致HBx 蛋白羧基端129-154aa 的缺失［3］。体外实验证实，缺失突变型HBx-128w较之野生型HBx具有更强的促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用［4］。2012 年3 月—2016 年10 月，我 们 构 建 了含HBx-128w 序列的真核表达载体，以空载体pcDNA3.1 为对照组，分别转染人肝癌细胞系Huh7，利用长链非编码RNA（lncRNA）芯片筛选相关差异表达基因，并初步探讨HCC 中差异基因丙酮酸脱氢酶激酶2（PDK2）表达的调控机制。

1 材料与方法

1.1 材料 人肝癌细胞系Huh7购自中国科学院细胞库；重组表达载体pcDNA3.1-HBx-128w 购自上海锐赛生物技术有限公司；真核表达载体pcDNA3.1和脂质体LipofectamineTM2000 转染试剂盒购自美国Invitrogen 公司；鼠抗HBxAg 单克隆抗体、辣根过氧化酶标记的鼠抗兔IgG 二抗、ECL 化学发光检测试剂盒购自美国Santa Cruz 公司；兔抗PDK2 单克隆抗体购自英国Abcam 公司；十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶配制试剂盒购自上海碧云天公司；G418 培养液、胎牛血清、DMEM 培养液、Opti-MEM 培养液、胰蛋白酶、购自美国Gibco BRL 公司；聚偏二氟乙烯膜、Western 电转移系统购自美国Bio-Rad 公司；……