王 晨，马欣欣，平琳琳，王 谦

（河北大学 生命科学院，河北 保定 071000）

当前食（药）用真菌与发酵工业的交叉，成为食用菌行业进步的标志之一。液体菌种具有培养周期短、不受季节限制、利于规模化、接种方便、菌丝体生长一致等优势[1-2]，液体培养的方式能够有效提高菌类产量和效益，而且在现代农业中的黑木耳产业，液体菌种的应用已经成为产业常态。与此同时，对于其液体发酵过程中产生的次生代谢产物如黄酮、多酚、多糖等[3-6]的应用也愈发受到重视，良种选育已经成为发酵工业重要的应用基础研究领域。黑木耳（Auricularia auriculae）作为我国食用菌产量排名第二的菌类，不仅口味鲜美而且营养丰富，还具有抗癌、降血脂、提高免疫力等作用[7]。目前食（药）用菌一般采用孢子分离、杂交育种、紫外诱变等育种方法，近年来出现的ARTP诱变技术育种[8]，在黑木耳育种研究中尚无报道。本试验探究了ARTP育种技术在选育发酵性状优良的黑木耳细胞工程菌株方向的应用，并对其在发酵、液体菌种应用、多糖含量等方面开展了初步研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌种

供试菌株：出发菌株为黑木耳黑威半筋品种，黑龙江微生物研究所提供；细胞工程菌株：Aa66、Aa98、Aa101、Aa285。以上菌株均保存于河北大学食药用真菌研究所。

1.1.2 供试培养基

PDA培养基：马铃薯（去皮） 20.0%、葡萄糖2.0%、麸皮 2.0%、琼脂 2.0%、KH2PO40.1%、Mg－SO40.1%，pH自然。

液体发酵培养基：葡萄糖2.5%、玉米粉0.5%、豆粕粉0.5%、MgSO40.1%、酵母膏0.2%、KH2PO40.2%，pH自然。

1.2 ARTP诱变育种技术选育黑木耳细胞工程菌株

1.2.1 菌丝体的制备

按液体发酵培养基配方进行配制，500 mL三角瓶中装液量200 mL，通过无菌操作对活化后的PDA斜面黑木耳菌种进行接种[9]，并于28℃、160 r·min-1恒温振荡培养5 d[10]，获得黑木耳菌丝体。……