茵陈蒿汤抑制JAK2/STAT3信号通路调控肝癌细胞增殖与凋亡
2021-05-07谭章斌丁文俊徐由财刘彬
谭章斌,丁文俊,徐由财,刘彬
肝癌是最常见的原发性恶性肿瘤之一,是全球癌症相关死亡的第三大原因,其中在亚洲地区发病率与死亡率最高[1-2]。尽管在肝癌的早期发现、诊断和治疗方面取得了进步,但总体预后仍不理想,由于术后复发与转移,肝癌患者的5年生存期仍为20%~30%[3-4]。因此,继续寻找防治肝癌的有效药物将有助于改善肝癌的治疗。中草药已有数千年应用历史,由于其低毒性和良好的临床疗效,被认为是开发抗恶性肿瘤的最有希望的替代/补充药物之一[5]。茵陈蒿汤是临床常用的中药经方,据报道有抗肝癌作用[6]。然而,其抗肝癌作用的分子机制尚未完全了解。JAK2/STAT3信号通路激活对细胞正常生长至关重要,但包括肝癌在内的多种恶性肿瘤中JAK2/ STAT3呈异常激活,驱动肿瘤细胞增殖、抗凋亡、侵袭与转移等多种生理学行为[7]。本研究探讨了茵陈蒿汤对肝癌细胞的抑制作用以及对JAK2/STAT3信号通路的调控。
1 材料与方法
1.1 试剂
DMEM、胎牛血清(FBS)、青霉素/链霉素、PBS缓冲液从美国Gibco公司购买。c-Myc(#18583,E5Q6W)、Bcl-XL(#2764,54H6)、p-JAK2(#4406,D15E2)、JAK2(#3230,D2E12)、STAT3(#30835,D1B2J)、GAPDH(#5174,D16H11)一抗从美国CST公司购买,p-STAT3(ab76315,EP2147Y)、Cyclin D1(ab134175,EPR2241)以及Mcl-1(ab243136,19C4-15)一抗从美国Abcam公司购买。 CCK-8、钙黄绿素/PI染色试剂盒从日本东仁有限公司购买。EdU染色试剂盒从广州锐博公司购买。
1.2 茵陈蒿汤制备
茵陈蒿、栀子、大黄提取物购买自西安开来有限公司,该公司已参照《中国药典》对所生产的中药提取物进行质量控制。生药 ∶提取物比例为10 ∶1,按照茵陈 ∶栀子 ∶大黄=3 ∶2 ∶1比例混合,使用双蒸水溶解三种中药提取物,过滤备用。
1.3 细胞培养
HepG2人肝癌细胞系从中国科学院上海细胞库购买。……
