曹相玫，徐 辉，武艳玮，游南林，于佳翔，马 杰

（宁夏医科大学基础医学院病理学系，宁夏银川 750004）

神经胶质瘤是由神经干细胞或祖细胞引起的神经系统常见的原发肿瘤，呈侵袭性生长，对放化疗不敏感，治疗效果有限［1］。细胞自噬是一种亚细胞水平的自我吞噬，自噬基因的异常表达能够启动或抑制某些肿瘤的形成［2］。研发新的自噬诱导剂或抑制剂促使神经胶质瘤细胞发生自噬性死亡，已经成为神经胶质瘤治疗的新方向。雷帕霉素（rapamycin，Rapa）是一种抗真菌的大环内酯类抗生素，与细胞毒性药物或酪氨酸激酶抑制剂联合应用能够抑制肿瘤［3］，其机制主要是通过诱导细胞自噬而不是凋亡发挥作用［4］。本项工作通过在细胞体外实验中观察Rapa 神经胶质瘤U87-MG 细胞的抑制作用和对自噬相关蛋白的影响，进一步探讨Rapa 促进U87-MG 细胞自噬的作用和可能机制。

材料和方法

1 细胞和主要试剂

人胶质瘤细胞株U87-MG 由本实验室储存。Rapa 批号CAS 53123-88-9；0.25%胰蛋白酶消化液（含EDTA）和SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒（北京索莱宝科技公司）；DMEM 高糖培养液（HyClone）；Ⅰ抗兔抗［哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）、p-mTOR、LC3-II、beclin-1、70 kD核糖体蛋白S6 激酶（70 kD ribosomal protein S6 ki⁃nase，p70S6K）、p-S6、p-MAPK 和胶质细胞原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic pretein，GFAP）］、鼠抗β-actin 抗体和Ⅱ抗（HRP 标记的山羊抗兔IgG 和山羊抗鼠IgG）均购自Cell Signaling Technology；二甲基亚砜（DMSO）和噻唑蓝（MTT）购自Sigma。

2 实验仪器

二氧化碳细胞培养箱（ESCO）；低温冷冻离心机（Sigma）；超净工作台（Thermo）；连续光波酶标仪和凝胶化学发光成像系统（上海勤翔仪器厂）。

3 实验方法

3.1 细胞培养与药物分组 将U87-MG细胞以1×105个接种于25T 透气培养瓶中，用含10%胎牛血清的DMEM 高糖培养液，在37℃、5%CO2培养箱常规培养中，隔日换液，3～4 d 传代。……