黄奕芝，杨紫青，温炜杰，唐 勤，方乐堃，李孟鸿

（中山大学附属第六医院胃肠病学研究所，广东广州 510655）

肝癌是全球常见的消化系统恶性肿瘤之一，中国是占全球肝癌发病率和死亡率最高的国家，分别为46.6%和47.1%，发病率和死亡率占我国恶性肿瘤前5 位［1］。我国肝癌5 年生存率仅为12.1%［2］。RNA 甲基化修饰是目前的研究热点，大量研究证明RNA m6A 甲基化与肝癌发生发展密切相关，而关于RNA m5C 甲基化与肝癌的关系研究较少［3］。NOP2/Sun RNA 甲基转移酶家族成员2（NOP2/Sun RNA methyltransferase 2，NSUN2）编码的蛋白是一种m5C RNA甲基转移酶，与食管癌、头颈癌、乳腺癌、胃癌和膀胱癌等肿瘤［4］的发生发展密切相关，而其在肝癌中功能及作用机制研究鲜少报道。本研究通过分析TCGA 数据库结果并结合在肝癌细胞系中进行的实验，探讨NSUN2 在肝癌增殖中的作用，并探索其机制。明确NSUN2 在肝癌中的功能及作用机制将丰富肝癌发生发展的机制，为肝癌治疗提供新的治疗靶点。

材料和方法

1 临床样品

肝癌患者肿瘤样本来源于中山大学附属肿瘤医院。所有样本采集均获得患者的知情同意并获得研究中心机构审查委员会的同意。

2 细胞

人来源的肝癌细胞系Huh7 和SNU182 来源于ATCC。Huh7 细胞培养在含10%胎牛血清的DMEM培养基中，SNU182 细胞培养在含10%胎牛血清的RPMI-1640 培养基中，放置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中。

3 主要试剂

DMEM 培养基、RPMI-1640 培养基和胰酶（Corn⁃ing）；胎牛血清（GIBCO）；Trizol（Ambion）；逆转录试剂盒（TOYOBO）；2×SYBR Green 和蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂混合物（Bimake）；细胞裂解液（碧云天生物技术有限公司）；BCA 蛋白定量试剂盒（贝博）；5×SDS 上样缓冲液（鼎国昌盛）；抗NSUN2 抗体（Pro⁃teintech）；……