梁赣锋，沈 扬，俞逊婕，吴海燕

(浙江省台州市第一人民医院感染科 318020)

手足口病是一种由肠道病毒引起的常见传染性疾病，轻度患者临床症状以手、足、口腔等部位出现疱疹为主，重症患者可出现心肌炎、肺水肿、无菌性脑炎等并发症甚至出现死亡[1]。重症病例多由肠道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)感染引起，病情凶险，病死率高[2]。因此深入研究EV71感染发生的机制对提高临床疗效具有重要的临床指导意义。去泛素化酶是一类数量很大的蛋白酶类家族，可通过对底物蛋白的去泛素化来调控蛋白活性[3]。维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(RIG-Ⅰ-1ike receptor，RLR) 为机体识别病毒的主要免疫识别受体，其介导的信号通路在抵抗病毒感染的过程中发挥着重要作用[4]。有研究显示[5]去泛素化酶对EV71感染有一定调控作用，但其是否通过RLR信号通路发挥调控作用尚不清楚。本研究基于RLR信号通路研究去泛素化酶对EV71感染的调控机制，以期为临床防治EV71感染提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1细胞

人横纹肌肉瘤细胞A-204购于上海雅吉生物科技有限公司。

1.1.2主要试剂和仪器

10%胎牛血清(上海彩佑实业有限公司)；DMEM培养基(上海达豪生物科技有限公司)；空载质粒(上海柯雷生物科技有限公司)；去泛素化酶USP4过表达质粒(上海权阳生物公司)；总RNA提取试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；反转录试剂盒(北京庄盟国际生物基因科技有限公司)；RIPA裂解液(北京普利莱基因技术有限公司)；Thermo MX150离心机(苏州亚凡生物技术有限公司)；BCA试剂盒(美国Thermo公司)；……