赵凌军 杨卫民 杨潇远 李季

视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)是常见的儿童眼内恶性肿瘤，发病率及死亡率高，严重威胁着患儿视力与生命安全[1-2]。RB传统治疗方法包括放射治疗、化学治疗、激光以及眼球摘除等，但极易引起细菌感染、永久失明等，而且多数预后不良[3-5]。随着现代医疗技术的不断提高，RB的治疗目标从只能保护患儿生命转向提高患儿生存质量；不仅需要保留患儿眼球，更需要保留患儿视功能。长链非编码RNAs(long noncoding RNAs，lncRNAs)是由200多个碱基组成的一种非编码RNA，具有抑制肿瘤细胞增殖与迁移的功能[6]。母系表达基因3(maternally expressed gene 3，MEG3)定位在人类14q32.3染色体上，在人体正常组织中能够广泛表达，在一些肿瘤细胞中表达下降，且MEG3过表达能够抑制肿瘤细胞增殖与迁移[7-8]。目前，lncRNA MEG3对RB的作用机制相关研究报道较少。因此，本研究基于Wnt/β-catenin信号通路探讨lncRNA MEG3对RB细胞增殖与迁移的作用，为临床RB治疗提供一定的理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料人RB细胞系SO-Rb50细胞购自上海邦景实业有限公司。胰蛋白酶、胎牛血清(FBS)、RPMI 1640培养基、Wnt/β-catenin信号通路激活剂氯化锂(LiCl)(美国Gibco公司)；兔抗人Wnt1多克隆抗体、兔抗人β-catenin、Cyclin D1单克隆抗体、辣根过氧化物标记的山羊抗兔IgG(日本TaKaRa公司)；CCK-8试剂盒、二喹啉甲酸(BCA)试剂盒(美国MedChemexpress生物科技公司)；荧光定量试剂盒、反转录试剂盒(日本TaKaRa公司)；脂质体Lipofectamine TM2000转染试剂盒(Invitrogen公司)；CO2细胞培养箱(美国SIM公司)；DFM-60C倒置荧光显微镜(上海蔡康光学仪器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养取常规冻存复苏的RB细胞系SO-Rb50细胞，接种于含体积分数10% FBS、100 U·mL-1青霉素及20 mg·L-1庆大霉素的RPMI 1640培养基，置于37 ℃、含体积分数5% CO2培养箱内培养。……