卞龙艳 庄敏 李姝 戴颖

白内障是以晶状体上皮细胞损伤引起晶状体混浊为主要特征的眼科疾病[1]，晶状体上皮细胞凋亡是其发生的主要病理基础。Bai等[2]研究证实，活性氧簇(ROS)大量蓄积引起的氧化应激反应可以通过激活p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路诱导人晶状体上皮细胞凋亡，进而导致白内障发生。最近有研究发现，心肌梗死相关转录本(myocardial infarction-associated transcript，MIAT)可能是白内障疾病中一个很有前途的功能性长链非编码RNA(lncRNA)[3]，可以作为内源竞争性RNA与各种编码蛋白质的信使RNA竞争性结合或共享微小RNA(miRNA)，从而抑制 miRNA对靶基因的调控[4]。目前关于lncRNA-MIAT在白内障中的作用和调控作用尚未明确。因此，本研究通过过氧化氢(H2O2)诱导人晶状体上皮细胞氧化应激损伤模型，探讨lncRNA-MIAT对人晶状体上皮细胞凋亡和氧化应激的调控作用及其机制，以期为白内障的发病机制研究及临床治疗提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 材料人晶状体上皮细胞株 HLE-B3购自美国典型菌种保藏中心(ATCC)。DMEM培养基(美国Gibco公司)；Annexin V-FITC/PI 流式细胞检测试剂盒(美国BD公司)；CCK-8、ROS、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(上海碧云天有限公司)；SYBR Premix Ex Taq 试剂盒(日本TaKaRa公司)；TaqManTMMicroRNA逆转录试剂盒和Taqman 2× universal PCR Master Mix试剂盒(美国Applied Biosystems公司)；双荧光素酶报告试剂盒(美国Promega公司)；pcDNA3.1载体质粒和lipofectamineTM2000转染试剂(美国Invitrogen公司)；miR-22 inhibitor、lncRNA-MIAT inhibitor及其相应的阴性对照品均由上海吉玛基因公司合成；免疫印迹一抗B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、p-p38 MAPK、 p38 MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK(美国Abcam公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及转染人晶状体上皮细胞株 HLE-B3用含体积分数10%胎牛血清、100×103U·L-1青霉素和100 mg·L-1链霉素的DMEM完全培养基于37 ℃、体积分数5%CO2饱和湿度的环境中培养。……