石磊 王爱媛 归东梅 杨宏伟

年龄相关性黄斑变性(AMD)是导致视力不可逆丧失的主要原因之一[1-2]，其病因是多因素的，其中包括阳光照射[3]。阳光中紫外线B(ultraviolet，UVB)是皮肤癌和眼部疾病的主要病因，如AMD[4-5]。在视网膜中，视网膜色素上皮(RPE)细胞在维持内环境稳定中起着至关重要的作用，是视觉的重要调节因子[6]。RPE细胞的死亡和功能障碍与AMD的发病密切相关，AMD的早期和关键事件使RPE细胞变性和损害[7]，继而导致感光细胞死亡、视力丧失。

导致AMD发生的许多病理因素需要RPE细胞中细胞自噬-溶酶体途径(autophagy lysosome pathway,ALP)和泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system，UPS)降解和循环[8]，因此，这两个系统在维持细胞内环境稳定中有重要作用。越来越多的研究表明，RPE细胞自噬能力的损害与AMD的发生密切相关[9-10]。然而UVB是否通过改变RPE细胞自噬导致AMD的发生发展仍然未知。本研究拟用人RPE细胞株ARPE-19细胞进行UVB照射，检测UVB对细胞生长及其自噬的影响。

1 材料与方法

1.1 材料ARPE-19细胞株来自美国菌种保存中心(ATCC)。紫外线剂量计购自Daavlin 公司(美国)。细胞生长测定试剂盒CDG1、雷帕霉素(rapamycin，RAPA)、 环氧霉素(epoxomicin， EPO)、青霉素和链霉素、氯化铵(NH4Cl)购自Sigma公司(美国)。抗Beclin-1、抗LC3、抗p62、抗β-actin和抗山羊-HRP购自Santa Cruz Biotechnology(美国)。抗兔-HRP和抗鼠-HRP等二抗购自GE公司(美国)。DMEM和胎牛血清购自Gibco公司(美国)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与UVB照射ARPE-19细胞在添加体积分数10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素和100 mg·L-1链霉素的DMEM中保存。细胞在37 ℃、体积分数5%CO2条件下加湿培养。细胞用PBS洗2次后，加入PBS覆盖，用UVB照射仪(Joland,美国) 进行不同剂量UVB照射(UVB照射组)，用IL1400A 放射计联合UVB探测仪(美国国际光学公司)检测UVB输出剂量。……