刘磊

（辽宁省阜新市第二人民医院（阜新市妇产医院）检验科，辽宁 阜新123000）

肺炎链球菌是引起小儿肺炎的主要病原体，若未得到及时诊治会引发脑膜炎、菌血症等，严重者将出现多器官功能衰竭及死亡，故早期诊断肺炎链球菌并予以抗生素治疗具有重要意义[1]。以往实验室检查肺炎链球菌主要采用血培养和痰培养分离肺炎链球菌作为诊断依据，但肺炎链球菌生长缓慢，鉴定时间较长，且阳性率较低，往往导致患儿错过最佳治疗时间，故寻找更为快捷有效的诊断方式已成为临床研究的热点[2]。痰革兰染色检验是一种简单快捷的检验方法，但结果受检验医师的主观影响。由于肺炎链球菌抗原是一种可溶性抗原，对尿液中的肺炎链球菌抗原进行检测可作为有力的辅助诊断依据。鉴于此，本研究旨在探讨尿抗原联合痰革兰染色检验在小儿肺炎链球菌肺炎诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料选取2018年8月至2019年8月于本院就诊的364例下呼吸道感染患儿，其中男206例，女158例；年龄0～6岁，平均（2.86±0.64）岁；病程7～16 d，平均病程（10.17±2.34）d。所有患儿近7 d未服用糖皮质激素及免疫调节剂，排除先天免疫系统疾病、肺结核、支气管哮喘者。

1.2 仪器与试剂Vitek2-Compact自动化微生物鉴定仪、光学显微镜（OLYMPUS）、二氧化碳孵育箱、温箱、快速革兰染色液（Oxioid）、琼脂平板、麦康凯平板、巧克力平板（上海科玛嘉微生物有限公司）、尿肺炎链球菌抗原试剂（BINAX）。

1.3 方法对所有患儿行痰培养、尿抗原检测、痰革兰染色镜检。痰培养：①痰标本采集：医嘱患儿反复用清水漱口，对于痰液较少者可将高渗盐水雾化吸入后拍背诱导排痰，将无菌棉签伸入咽喉采集痰液。②分离培养：在痰标本内滴入少量0.9%氯化钠溶液，搅拌混匀后制成均匀薄片，在光学显微镜下观察白细胞和上皮细胞数目，对样本进行分类：白细胞≥25个，鳞状上皮细胞＜10个为A类（完全合格样本）；白细胞11～24个，鳞状上皮细胞≥10个为B类（可疑合格样本）；白细胞≤10个，鳞状上皮细胞≥10个为C类（不合格样本），其中A类和B类样本可用于痰培养。对痰标本采用无菌盐水洗涤，促使痰液均质化。将其接种于琼脂平板、麦康凯平板和巧克力平板，放于二氧化碳孵育箱中35℃培养24 h，并用自动化微生物鉴定仪鉴定。痰革兰染色镜检：待其自然干燥后进行革兰染色镜检。尿抗原检测：使用无菌尿杯采集患儿入院次日晨尿，静置到室温后，将尿肺炎链球菌抗原试剂提供的棉枝浸入尿液，并将其插入试剂条的两孔间固定，在远离棉枝的空洞中滴入试剂，合并试剂条，让棉枝上的尿液与硝酸纤维塑膜充分接触，静置15 min，若出现2条线则为阳性，若只有1条线则为阴性，若未出现线条表明检测失败。

1.4 统计学方法采用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理，计数资料组间率（%）比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检测结果以痰培养为诊断金标准，364例下呼吸道感染患儿中共检出128例小儿肺炎链球菌肺炎，经痰革兰染色镜检感染者181例，未感染者183例，经尿抗原检测感染者139例，未感染者225例，两种方法联合检测感染者146例，未感染者218例，见表1。

表1 检测结果

2.2 诊断效能以痰培养为诊断金标准，痰革兰染色镜检联合尿抗原检测的灵敏度、特异度、准确度高于痰革兰染色镜检、尿抗原检测单独检查，漏诊率、误诊率低于痰革兰染色镜检、尿 抗原检测单独检查，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 诊断效能分析（%）

3 讨论

目前，临床主要通过实验室检查、临床症状、肺部X线片等综合检查诊断小儿肺炎链球菌肺炎，确诊依据为呼吸道标本分离的肺炎链球菌，但肺炎链球菌肺炎的早期病原学诊断较困难，导致患儿病死率较高，故寻找更有效的检测方法具有重要意义[3]。临床检测肺炎链球菌的方法包括痰培养、血培养、痰涂片革兰染色镜检、抗原检测、聚合酶链反应、活组织病理检查等，其中痰培养和血培养是诊断的金标准，但检查时间较长，且由于受培养温度、接种时间等多种外在因素影响，导致其灵敏度、特异度较低，极易导致患儿错过最佳治疗时机；活检属于有创性操作，技术要求较高，花费高昂；聚合酶链反应的结果易受基因缺失与突变的影响而发生漏诊和误诊[4-5]。

本研究结果显示，相较于痰革兰染色镜检、尿抗原检测的单独检查，二者联合检测的灵敏度、特异度、准确度均较高，漏诊率、误诊率较低，表明痰革兰染色镜检联合尿抗原检测适用于肺炎链球菌的早期诊断。痰革兰染色镜检利用的肺炎链球菌属于革兰阳性双球菌，因其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多，经染色处理后可呈现紫色，可与周围环境清晰区分，在光学显微镜下可观察到其形态是矛尖状成双排列，偶尔呈现短链状，特征较为典型[6]。但其检测结果受到标本采集、送检等外在因素影响可出现假阴性；在检测中肺炎链球菌可能被黏液包裹或被白细胞吞噬导致着色困难出现漏诊现象；部分肺炎链球菌的荚膜在抵抗白细胞吞噬时，可引起形态变化，特征失去典型性，较难分辨，故单独检测的诊断效能低于联合检测[7]。尿抗原检测的主要原理是肺炎链球菌C多糖抗原可经肺部的毛细血管循环流入代谢系统，并经尿液排出体外，因该抗原具有可溶性，在尿液中具有稳定含量，不受标本采集、抗生素等影响，故用胶体金法对尿液中的抗原进行检测具有较高的诊断效能[8-9]。但尿抗原检测的结果可能受接种肺炎链球菌疫苗的影响而出现假阳性，且由于肺炎链球菌肺炎患儿的尿液中抗原可持续数周或数个月，故该项检查无法判别患儿感染肺炎链球菌的时间，故临床诊断需与痰革兰染色镜检相结合[10]。

综上所述，痰革兰染色镜检联合尿抗原检测对肺炎链球菌诊断的灵敏度、特异度和准确度均较高，可作为小儿肺炎链球菌肺炎临床诊断的辅助手段。