猪GV/MⅡ期卵母细胞miRNAs表达谱及Npm2基因相关miRNAs筛选
2021-04-27严继猛刘耀文李鸿辉苏艳华普少瑕王海臻魏红江贾宝瑜成文敏
张 珂,严继猛,刘耀文,李鸿辉,陈 强,李 卓,苏艳华,普少瑕,王海臻,魏红江,贾宝瑜*,成文敏*
(1. 云南农业大学动物科学技术学院,昆明 650201; 2. 云南农业大学动物医学院,昆明 650201;3.云南农业大学 云南省动物基因编辑与体细胞克隆技术重点实验室,昆明 650201)
体细胞核移植技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是将体细胞注入去核的体外成熟卵母细胞中以产生新个体的技术,可用于研究基因组重编程、生产基因编辑动物和保护濒危物种。自克隆羊“多莉”出生后的24年内,尽管体细胞核移植技术在很多物种中均已获得后代,但克隆胚胎能够发育到成活个体的比例仍非常低,这极大程度限制了SCNT技术的应用[1]。优化SCNT技术参数并不能显著提高克隆效率,只有从理论上阐明SCNT机制才可以克服克隆胚胎发育异常瓶颈[2]。其中,供体细胞核不完全重编程是导致克隆效率低、胚胎表型异常和克隆动物成活率低的主要原因[3],然而SCNT介导的核重编程机制尚不明确,影响克隆胚胎发育能力的关键因子也不清楚[4]。
核质蛋白是一种组蛋白分子伴侣,其家族成员有3个同系物:NPM1、NPM2和NPM3[5]。其中,NPM2是卵母细胞和早期胚胎内特异性表达的蛋白,在精子染色质解聚[6]和体细胞重编程过程中发挥重要的作用[7]。NPM2是小鼠核仁组织区的组成部分,单独的NPM2可在体外使精子染色质解聚[8],Npm2缺失导致卵母细胞缺乏正常的核仁结构,说明以NPM2为基础的卵母细胞核仁区对早期胚胎发育过程中雄性染色体组装至关重要[9],发育过程中细胞内NPM2数量减少,会影响核组蛋白水平和染色体结构[10]。……
