唐取来，顾力行，周勇，吴寒，祝海川，顾潮江，周经娇，罗学刚，张同存,

(1.天津科技大学生物工程学院，天津市工业微生物重点实验室，天津 300457；2.武汉科技大学生命科学与健康学院，湖北 武汉 430065)

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-Cell,CAR-T)是通过基因改造技术，让T细胞表达嵌合抗原受体，使效应T细胞的靶向性、杀伤性和持久性均较常规应用的免疫细胞高，同时可以克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受状态。慢病毒载体是CAR-T基因治疗的重要载体，相比一般的逆转录病毒载体具有更高的安全性和高效性[1]。近年来，慢病毒载体已被广泛应用于传染性疾病、基因功能及恶性肿瘤的基因治疗领域[2-3]。探索药品生产质量管理规范(good manufacturing practice,GMP )级别规模化和可重复的慢病毒生产工艺，是临床试验和商业生产的迫切需求[4]。293T细胞是由293细胞派生出来的表达SV40大T抗原的人肾上皮细胞系。作为最常用的慢病毒包装细胞系，293T采用传统单层贴壁血清培养方式[5]。但是，血清贴壁培养存在成分复杂、含有动物成分且批次差异等问题[6]，同时贴壁培养过程中胰酶的使用会增加细胞脆性，导致细胞膜破裂。孙克宁等[7]研究表明胰酶的使用会降低慢病毒生产效率。相比较之下，无血清悬浮培养无动物来源的组分，减少了产物外源物质污染的风险，简化了下游纯化工艺，大大推进了其向临床级别产品的转变，且重复性好，生产效率高，可大规模高密度悬浮细胞培养，是哺乳动物细胞培养技术的发展方向[6]。……