吴蓉 曹佳睿 曹君 刘飞翔 杨猛 苏二正，2

（1. 南京林业大学轻工与食品学院，南京 210037；2. 南京林业大学南方现代林业协同创新中心 南京林业大学林业资源高效加工利用协同创新中心，南京 210037）

脂肪酶（EC 3.1.1.3）是一类作用于三酰基甘油的酯键，将其水解成脂肪酸、二酰基甘油、单酰基甘油和甘油的生物催化剂［1］。脂肪酶广泛存在于自然界各种动植物和微生物体内，是一种重要的酯键水解酶，具有高度的化学、区域和立体选择性，在非水相体系也具有高效的催化活性［2］。南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarcticalipase B，CALB）作为一种性能优异的脂肪酶，它既可以高效催化水溶性底物，也可以催化非水溶性底物［3］。因而，在生物柴油生产［4-7］、有机合成［8-10］、医药中间体合成［11-12］、手性化合物拆分［13］、木质素增值化利用［14］和氨解反应［15］等领域得到广泛应用。

CALB 来源于在南极大陆被分离得到的南极假丝酵母，原始菌株酶产量低，发酵周期长，而且分离成本高，难以满足应用需求［16］，所以目前基因工程技术法是生产CALB 的主要方法，通过构建异源表达系统实现CALB 的高效生产，将CALB 分别在大肠杆菌［17-22］、毕赤酵母［23-25］、酿酒酵母［26］和米曲霉［27］等宿主中进行表达。由于其具有遗传背景清楚，重组技术成熟，所用培养基简单廉价等优点［28-29］，大肠杆菌是基因工程中最常用的宿主菌。Liu 等［18］首次在大肠杆菌Origami B 中进行了CALB的功能性表达，随后添加不同信号肽［30-31］、使用不同宿主菌［17］、密码子优化［19］和融合标记［32］等方法被广泛应用于提高大肠杆菌表达系统中CALB 的可溶性表达。……