彭 成，刘佩雷，陶 钧，张 乐，陶奇昌，代建昊，李 强

急性脊髓损伤(Acute Spinal Cord Injury，ASCI)分为急性期(2周内)和慢性期(2周～6个月)病理改变，其中急性期临床症状以机械性脊髓神经结构破坏为主[1]，如感觉、运动功能下降或丧失，部分患者急性期神经缺失症状可能不明显，导致治疗延误。而持续的炎症反应、神经细胞凋亡将进一步加重神经细胞的功能丧失，这是导致ASCI后神经功能永久性障碍的重要原因之一[2]。研究发现，ASCI急性期和慢性期均可观察到自噬活性的增强，且与神经细胞的功能障碍有关[3]。JAK2/STAT3信号通路是真核生物体内调控多种细胞因子和生长因子表达以及细胞增殖、分化和凋亡的重要细胞内途径之一，同样也参与ASCI的发生发展过程[4]。基于此，本研究观察大鼠ASCI后神经细胞炎症、自噬、凋亡相关因子的表达水平，揭示其JAK2/STAT3信号通路活化机制，从而为ASCI的靶向治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和设备 主要仪器：光学显微镜和荧光显微镜购自日本奥林巴斯公司，蛋白电泳仪、超声溶解仪购自北京六一厂，PVDF膜购自美国R&D公司。主要试剂：兔抗大鼠白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、热休克蛋白-27(Heat Shock Protein-27，HSP-27)单克隆抗体一抗及羊抗兔对应抗体二抗，辣根酶标记链霉卵白素工作液均购自江苏碧云天科技有限公司；BCA蛋白定量检测试剂，兔抗大鼠JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、Caspase-3、Bax/Bcl-2蛋白和β-actin抗体一抗及羊抗兔对应抗体二抗均购自美国Sigma公司；兔抗大鼠微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-Associated Protein1 Light Chain 3，MAP1LC3)-Ⅱ抗体一抗及羊抗兔对应抗体二抗均购自北京中杉金桥生物有限公司；……